Quick Cell支原體快速檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 保存 | 價(jià)格(元) |
Quick Cell 支原體快速檢測(cè)試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng)) | C4056L1060 | 50 T | -20℃ | 1350 |
Quick Cell支原體快速檢測(cè)試劑盒試劑盒組成
（1）溶液Ⅰ：1150 μL （50次檢測(cè)）
（2）溶液Ⅱ：50 μL（50次檢測(cè)）
（3）溶液Ⅲ：指示劑，50 μL（50次檢測(cè)）
（4）陽(yáng)性支原體DNA：50 μL
（5）礦物油：1500 μL
使用方法
1. 待測(cè)樣品的準(zhǔn)備：為了準(zhǔn)確判斷細(xì)胞是否有支原體的污染，待測(cè)的細(xì)胞培養(yǎng)液樣品來源于至少培養(yǎng)三天且匯合度在70-90%左右的細(xì)胞培養(yǎng)上清（貼壁細(xì)胞），無需離心。懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞也需要在換液傳代后，至少讓細(xì)胞生長(zhǎng)3天再取培養(yǎng)液進(jìn)行檢測(cè)，也無需離心。哺乳動(dòng)物細(xì)胞的存在不會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。
注：收集的待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液樣品如果不立即檢測(cè)，請(qǐng)放于-20℃或-80℃冰箱保存，不得放于室溫或4℃冰箱。樣品在-20℃至少可以保存一個(gè)月，在-80℃可以*保存。此外，為了節(jié)約檢測(cè)成本，可以將不同時(shí)間收集的樣品放于-20℃或-80℃冰箱保存，而后一起檢測(cè)。
2. 反應(yīng)體系的配制
表1：恒溫反應(yīng)體系的配制
組 份 | 理論單個(gè)樣品用量 | 樣品總數(shù) | 總體積 |
溶液Ⅰ | 23 μL | N | 23×N×1.08 μL |
溶液Ⅱ | 1 μL | N | 1×N×1.08 μL |
溶液Ⅲ | 0.18 μL | N | 0.18×N×1.08 μL |
（1）將溶液Ⅰ、溶液Ⅲ從-20℃冰箱中取出，待其融化后（可在37 ℃ 水浴內(nèi)放置5-10分鐘以幫助融化），從-20℃冰箱中取出溶液Ⅱ置于冰上。吹吸均勻后，按表1比例，混合溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ。如有多個(gè)樣品，為了防止移液誤差，建議溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ用量乘以系數(shù)1.08，保證每個(gè)反應(yīng)管中的反應(yīng)液足量。從配液開始的所有步驟，均在冰上操作。
舉例：如果待測(cè)樣品為3個(gè)（加上1個(gè)陰性和1個(gè)陽(yáng)性對(duì)照），則樣品總數(shù)為5個(gè)。溶液Ⅰ的總體積為23×5×1.08=124.2μL，溶液Ⅱ的總體積為1×5×1.08=5.4μL，溶液Ⅲ的總體積為0.18×5×1.08=0.972 μL將溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ混合均勻。
注：溶液Ⅱ必須一直在-20 ℃冰箱中保存，并在操作時(shí)置于冰上。溶液Ⅱ即使在-20 ℃條件下仍為液態(tài)，不需置于室溫。
（2）將上述配制好的反應(yīng)體系，吹打均勻后，按每管24 μL分裝到0.2 mL的PCR管中。盡量保證每管的反應(yīng)液體積一樣。 PCR管應(yīng)該使用透明度良好的薄壁PCR管。
（3）往測(cè)試管（Test）中加入1μL待測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)液；往陽(yáng)性對(duì)照管（Positive）中加入1 μL陽(yáng)性支原體DNA；往陰性對(duì)照管（Negative）中加入1μL滅菌水；反應(yīng)液的總體積為25 μL。
注1：裝有陽(yáng)性支原體DNA的螺口管開蓋之前，用力甩一下，或者用迷你離心機(jī)即可。
注2：進(jìn)行反應(yīng)體系配制的房間，與進(jìn)行樣品前處理、加陽(yáng)性對(duì)照DNA、樣品DNA的房間分開。
3. 反應(yīng)
PCR儀設(shè)置程序：61℃，60 min；10℃, forever；熱蓋溫度，100 ℃。
注意：若實(shí)驗(yàn)室反應(yīng)場(chǎng)所沒有PCR儀，可用水浴鍋代替，水浴鍋顯示溫度與實(shí)際溫度的溫差不超過0.5℃，另須往每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)加入25μL礦物油，以防止水份揮發(fā)，然后蓋上蓋子，將反應(yīng)管插入帶孔的漂板內(nèi)，放入已經(jīng)升溫到61℃的水浴內(nèi)，準(zhǔn)確反應(yīng)60分鐘。
4. 結(jié)果判斷
61℃反應(yīng)60分鐘后，立刻取出反應(yīng)管，放于室溫。以一張白紙或白色泡沫盒為背景，通過反應(yīng)管溶液顏色的變化，即可判斷檢測(cè)結(jié)果。如果溶液為藍(lán)綠色，則說明有支原體污染；如果為紫紅色，則說明沒有支原體污染（如圖1）。
注：在61℃反應(yīng)的時(shí)間必須準(zhǔn)確計(jì)時(shí)，zui多不得超過5分鐘，以免出現(xiàn)假陽(yáng)性。必須在反應(yīng)后2小時(shí)內(nèi)進(jìn)行結(jié)果判斷，避免室溫下擴(kuò)增反應(yīng)進(jìn)行，影響結(jié)果判別。
注意事項(xiàng)
1．必須確保使用的移液槍本身沒有殘留的支原體，盡量用新購(gòu)移液器、新開封的槍頭操作；整個(gè)操作過程，佩戴口罩，不要開口說話。由于本試劑盒非常靈敏，移液槍如吸附有，或者人為帶入支原體均有可能造成假陽(yáng)性。
2．使用帶濾芯的吸頭吸取溶液和陽(yáng)性支原體等。如果沒有帶濾芯的吸頭，至少應(yīng)該使用新開封的吸頭。
3．檢測(cè)過程中，用過的各類吸頭、離心管務(wù)必小心處理，應(yīng)裝入含有半瓶水的帶蓋的、可密封的垃圾瓶?jī)?nèi)。反應(yīng)后的PCR管，不要開蓋，用過后將其用自封袋密閉，扔到遠(yuǎn)離細(xì)胞房的獨(dú)立垃圾桶內(nèi)。
4．如果細(xì)胞被支原體污染，可以選購(gòu)本公司或其他供應(yīng)商提供的去除試劑今早去除。
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