Alexa Fluor 488 標(biāo)記鬼筆環(huán)肽(綠色)
產(chǎn)品名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 保存 | 價(jià)格(元) |
Alexa Fluor 488 標(biāo)記鬼筆環(huán)肽(綠色) | C6242L0520 | 300 T | -20℃ | 1950 |
Alexa Fluor 488 標(biāo)記鬼筆環(huán)肽(綠色)運(yùn)輸與保存方法
冰袋運(yùn)輸。收到貨后-20℃避光干燥保存,1年有效。
Alexa Fluor 488 標(biāo)記鬼筆環(huán)肽(綠色)使用方法:
1. 準(zhǔn)備1000x DMSO Alexa FluorTM 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽存儲(chǔ)液
用30µL DMSO 溶解粉末狀Alexa FluorTM 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽,可按需分裝并于-20℃避光干燥保存,分裝保存,避免反復(fù)凍融。
2. 準(zhǔn)備1x Alexa Fluor 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽工作液
吸取1µL 1000×Alexa Fluor 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽存儲(chǔ)液到1ml 含有1%BSA的PBS緩沖液中即可得到1×工作液。
注意:不同的細(xì)胞染色的情況不同,相應(yīng)Alexa Fluor 488鬼筆環(huán)肽使用量也需根據(jù)不同情況而定。
3. 細(xì)胞染色步驟
1)細(xì)胞培養(yǎng)過夜或更長,使其密度達(dá)到50-60%匯合度。
2)吸掉培養(yǎng)液,37℃預(yù)熱的1×PBS(pH 7.4)清洗細(xì)胞2次。
3)使用含有3-4%甲醛的PBS溶液進(jìn)行細(xì)胞固定,室溫固定10-30min。
注意:避免固定劑中含有甲醇成分,因?yàn)榧状荚诠潭ㄟ^程中可能破壞肌動(dòng)蛋白。
4)室溫條件下,用PBS清洗固定好的細(xì)胞2~3次,每次10min。
5)(可選):室溫條件下,用溶于PBS的0.1% Triton X-100溶液透化處理3-5min,從而增加其通透性。
注意:鬼筆環(huán)肽的分子量小,很容易通過細(xì)胞,一般情況下不需對(duì)細(xì)胞進(jìn)行冷丙酮和TRITON X-100處理。
6)室溫條件下,用PBS清洗細(xì)胞2~3次,每次10min。
7)每孔加入 Alexa Fluor 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽工作液100µl/孔(96孔板),室溫避光染色20-90min,夏季時(shí)間相對(duì)短些。
8)用PBS清洗細(xì)胞3次,每次5min,去除掉多余的Alexa Fluor 488標(biāo)記鬼筆環(huán)肽。
9)(可選):加入足量的即用型DAPI溶液對(duì)細(xì)胞核進(jìn)行復(fù)染,如:100µl/孔(96孔板),室溫3~5min。用PBS清洗細(xì)胞2次,每次5min。
10)于熒光顯微鏡或者共聚焦顯微鏡下進(jìn)行熒光觀察,選擇Alexa FluorTM 488激發(fā)/發(fā)射濾片(Ex/Em=493/517nm)和/或DAPI激發(fā)/發(fā)射濾片(Ex/Em=364/454nm)。