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武漢泰特沃斯科技有限公司
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聯(lián)系我時(shí)，請(qǐng)告知來(lái)自 環(huán)保在線武漢泰特沃斯科技有限公司，是國(guó)內(nèi)*的氣相色譜儀供應(yīng)商。GC2030系列氣相色譜儀是武漢泰特沃斯科技有限公司潛心研究研發(fā)出來(lái)的氣相色譜儀。以下由武漢泰特沃斯科技有限公司色譜技術(shù)人員主要介紹用氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測(cè)定植物油中角鯊烯含量。
武漢泰特沃斯科技有限公司，是國(guó)內(nèi)*的氣相色譜儀供應(yīng)商。GC2030系列氣相色譜儀是武漢泰特沃斯科技有限公司潛心研究研發(fā)出來(lái)的氣相色譜儀。以下由武漢泰特沃斯科技有限公司色譜技術(shù)人員主要介紹用氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測(cè)定植物油中角鯊烯含量。
角鯊烯是一種高不飽和的天然萜類化合物，屬于脂質(zhì)不皂化物，它初是從鯊魚的肝油中發(fā)現(xiàn)的，1914年被命名為Squalene，其化學(xué)名為(6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-六甲基-2,6,10,14,18,22-二十四碳六烯。它屬于開鏈三萜，又稱*萜，也稱鯊烯，具有提高體內(nèi)超氧化物歧化酶(SOD)活性、增強(qiáng)機(jī)體免疫能力、防癌、防心血管疾病、抗衰老、抗疲勞、抗腫瘤等多種生理功能。因此，被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥和化妝品等相關(guān)領(lǐng)域。
目前，AOAC(Revised 1996)標(biāo)準(zhǔn)中有測(cè)定角鯊烯含量的方法，此方法通過(guò)不皂化物提取，柱色譜分離，后采用滴定方法對(duì)角鯊烯進(jìn)行定量，檢測(cè)過(guò)程較為繁瑣，且后采用滴定法測(cè)量，誤差較大。文獻(xiàn)報(bào)道植物油中角鯊烯含量測(cè)定的方法較多，主要有高效液相色譜法、氣相色譜法、氣質(zhì)聯(lián)用法等。從采用的定量方式來(lái)看，利用高效液相色譜和氣相色譜法多采用外標(biāo)法定量，很少用到內(nèi)標(biāo)法，而氣質(zhì)聯(lián)用法在定量方式主要采用內(nèi)標(biāo)法定量。從采用的前理處理方法來(lái)看，主要有溶劑稀釋法、SPE柱法和皂化法。溶劑稀釋法直接進(jìn)樣，不僅會(huì)污染色譜柱，縮短色譜柱使用壽命，而且雜質(zhì)峰較多，影響與目標(biāo)峰的分離；SPE柱法雖說(shuō)能去除大部分油脂雜質(zhì)，但是仍有部分雜質(zhì)會(huì)殘留，殘留下來(lái)的雜質(zhì)出峰時(shí)間較長(zhǎng)，且使用SPE進(jìn)行前處理油脂樣品上樣量小，對(duì)于角鯊烯含量較低的樣品不適用，從目前的文獻(xiàn)報(bào)道中看，也僅有角鯊烯含量較高的橄欖油用SPE進(jìn)行前處理，該法前處理檢測(cè)成本較高不適合推廣使用；由于角鯊烯屬于脂質(zhì)不皂化物，因此本研究在文獻(xiàn)基礎(chǔ)上選擇不皂物提取經(jīng)典的方法——液液萃取法作為前處理方法。但不皂化物提取操作比較繁瑣，難免會(huì)有所損失，而內(nèi)標(biāo)定量方法會(huì)減少操作上的誤差，提高方法的準(zhǔn)確性。因此，本研究通過(guò)內(nèi)標(biāo)種類和用量的選擇，選出一種適用于氣相色譜法定量角鯊烯的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)角鯊?fù)椋⒁环N以角鯊?fù)闉閮?nèi)標(biāo)測(cè)定植物油中的角鯊烯含量的氣相色譜法，該法不僅分離效果好、靈敏度高、回收率高且成本低，適合植物油中角鯊烯含量測(cè)定方法推廣使用。
標(biāo)準(zhǔn)品的配制
準(zhǔn)確稱取25 mg角鯊烯、25 mg角鯊?fù)闃?biāo)準(zhǔn)品分別用正己烷定容于25 mL容量瓶，即配制成1 mg/mL角鯊烯標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液和1 mg/mL內(nèi)標(biāo)角鯊?fù)闃?biāo)準(zhǔn)溶液。
色譜條件
氣相色譜柱：HP-5毛細(xì)管柱，長(zhǎng)30 m，內(nèi)徑0.32 mm，薄膜厚度0.25 μm；載氣：高純氮?dú)?純度99.999% )，恒壓：16 psi，分流比1∶10；進(jìn)樣口溫度：250 ℃；柱溫采用程序升溫方式，以15 ℃/min的速率從160 ℃升溫到220℃，保持2 min，然后以5 ℃/min的速率升溫到280 ℃，保持20 min；后以5 ℃/min的速率升溫到300 ℃，保持2 min；FID檢測(cè)器：溫度300 ℃，氫氣流速40 mL/min，空氣流速450 mL/min，尾吹氣流速30 mL/min；進(jìn)樣量：1.0 μL。
內(nèi)標(biāo)物質(zhì)的選擇
采用內(nèi)標(biāo)法定量時(shí)，內(nèi)標(biāo)物的選擇是一項(xiàng)十分重要的工作。內(nèi)標(biāo)物選擇的原則為內(nèi)標(biāo)物應(yīng)當(dāng)是試樣中不存在的純物質(zhì)，這樣內(nèi)標(biāo)物能準(zhǔn)確加到樣品中去；內(nèi)標(biāo)物應(yīng)當(dāng)和被分析的樣品組分有基本相同或盡可能*的物理化學(xué)性質(zhì)(如化學(xué)結(jié)構(gòu)、極性、揮發(fā)度及在溶劑中的溶解度等)、色譜行為和響應(yīng)特征，與被分析物質(zhì)為同系物；同時(shí)，在色譜分析條件下，內(nèi)標(biāo)物必須能與樣品中各組分充分分離。根據(jù)以上特點(diǎn)，本研究從二十四烷、角鯊?fù)椤?α-膽甾烷、正三十二烷中篩選作為植物油中角鯊烯含量測(cè)定的內(nèi)標(biāo)，按1.2.3色譜條件進(jìn)行分析，這幾種內(nèi)標(biāo)出峰時(shí)間分別為二十四烷9.4 min，角鯊?fù)?2.9 min，5α-膽甾烷 19.4 min，三十二烷 20.6 min。通過(guò)8種植物油(花生油、油茶籽油、葵花籽油、米糠油、芝麻油、玉米油、特級(jí)初榨橄欖油、大豆油)進(jìn)行測(cè)定，只有角鯊?fù)槟芘c樣品中各組分*分離，且各植物油本底不含內(nèi)標(biāo)角鯊?fù)?，同時(shí)，角鯊?fù)榕c角鯊烯結(jié)構(gòu)相似，出峰位置較為接近且可*分離，滿足方法學(xué)中對(duì)內(nèi)標(biāo)的要求，因此，選用角鯊?fù)樽鳛榻酋徬庀嗌V法測(cè)定的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)。
目前，利用液液萃取法提取植物油中角鯊烯的方法主要利用外標(biāo)法定量，但是由于液液萃取前處理方法操作較為繁瑣，難免會(huì)有所損失。本研究通過(guò)8種植物油(花生油、油茶籽油、葵花籽油、米糠油、芝麻油、玉米油、特級(jí)初榨橄欖油、大豆油)，4種內(nèi)標(biāo)物質(zhì)(二十四烷、角鯊?fù)椤?α-膽甾烷、正三十二烷)進(jìn)行篩選，選出一種適合氣相色譜法定量植物油中角鯊烯的內(nèi)標(biāo)物質(zhì)角鯊?fù)?，只有角鯊?fù)槟芘c樣品中各組分*分離，且各植物油本底不含內(nèi)標(biāo)角鯊?fù)?，同時(shí)，對(duì)角鯊?fù)閮?nèi)標(biāo)加入量進(jìn)行選擇，建立一種以角鯊?fù)闉閮?nèi)標(biāo)定量角鯊烯的氣相色譜法，該方法加標(biāo)回收率為95.5%～103.0%，精密度為1.42%～5.89%，檢出限為0.05 mg/kg，由此可以看出，該方法不僅回收率高，重現(xiàn)性好，而且靈敏度高，該方法的建立不僅為植物油中角鯊烯的測(cè)定提供檢測(cè)參考，同時(shí)為下一步科學(xué)評(píng)價(jià)植物油營(yíng)養(yǎng)成分提供技術(shù)支撐。
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