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上海邦景實業(yè)有限公司
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冷凍細(xì)胞解凍過程
2023-11-6 閱讀(95)
收到細(xì)胞株包裹時，請檢查細(xì)胞株冷凍管是否有解凍情形，若有請立即通知。細(xì)胞株請盡速開始培養(yǎng)， 或立即冷凍保存(置于–70 °C，隔夜后，移到liq N2)。冷凍細(xì)胞解凍過程:
1、依據(jù)細(xì)胞株數(shù)據(jù)單 定之基礎(chǔ)培養(yǎng)基種類、血清種類和其它定之成份和比例，制備培養(yǎng)基。絕大多數(shù)之細(xì)胞均無法立即適應(yīng)不同之基礎(chǔ)培養(yǎng)基或不同之血清種類，若因?qū)嶒炐枰?，必須有所不同時， 務(wù)必以緩慢比例漸次改變培養(yǎng)基組成，確定細(xì)胞適應(yīng)后，方進(jìn)行所需之實驗。
2、 FBS (fetal bovine serum, 胚牛血清), CS (calf serum, 小牛血清)和HS (horse serum, 馬血清)，對細(xì)胞而言差異極大，請務(wù)必依據(jù)細(xì)胞株資料單定之血清種類培養(yǎng)之。
3、 將培養(yǎng)基置于37 °C 水槽中回溫， 回溫后噴以70 % 酒精并擦拭之， 移入無菌操作臺內(nèi)。 取出冷凍管， 立即放入37 °C 水槽中快速解凍，水面高度不可接近或高過冷凍管之蓋沿，否則易發(fā)生污染。輕搖冷凍管使其在1 分鐘內(nèi)全部融化后，以70%ethanol擦拭冷凍管外部，移入無菌操作臺。
4、 依據(jù)細(xì)胞種類和濃度，于無菌操作臺內(nèi)取10 ml 培養(yǎng)基加至T25 或T75 flask中。取出已解凍之細(xì)胞懸浮液， 緩緩加入T25 或T75 flask 內(nèi)之培養(yǎng)基，混合均勻，放入37 °C，5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
5、對絕大多數(shù)細(xì)胞而言，1 % 以下之冷凍保護(hù)劑DMSO，不會對細(xì)胞之貼附或活化有不良影響，不需立刻由解凍 細(xì)胞中去除，待第二天確定細(xì)胞生長或貼附良好后再去除即可。惟對極少數(shù)因?qū)MSO 敏感或會造成細(xì)胞分化之細(xì)胞，需立即去除DMSO 者，則可將解凍后之細(xì)胞懸浮液放入5 - 10 ml 培養(yǎng)基中，離心300 xg (約1000 rpm)，5 分鐘，小心移去上清液，加入適量新鮮培養(yǎng)基，將細(xì)胞均勻混合后，轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)瓶中，再放入37 °C， 5 % CO2 培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
