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植物細(xì)胞組織培養(yǎng)實驗操作
2019-7-5 閱讀(394)
植物細(xì)胞組織培養(yǎng)實驗操作
研究目的 植物細(xì)胞組織培養(yǎng)實驗動物以后分布情況，從而實現(xiàn)移植細(xì)胞的追蹤。特別是螢火蟲熒光素酶標(biāo)記的細(xì)胞，在小動物體內(nèi)移植以后，可以利用小動物活體成像儀實現(xiàn)細(xì)胞移植后的活體細(xì)胞追蹤。
實驗材料：
儀器設(shè)備：1．酒精燈、三角燒瓶，培養(yǎng)皿；2．鑷子、剪刀、剖針；3．雙筒解剖顯微鏡；4．光照培養(yǎng)箱或溫室；
材料煙草無菌苗、豌豆幼苗。
試劑
（1）MS培養(yǎng)基，植物激素：NAA、6-BA等；
（2）飽和漂液（次氯酸鈉）；
（3）70%酒精、100%酒精、酒精棉球；
（4）無菌水
四．實驗步驟
豌豆苗的莖尖培養(yǎng)
⑴取發(fā)芽6天的豌豆幼苗10株，簡取1厘米左右的莖尖，浸入70%的酒精中1分鐘，再浸入飽和次氯酸鈉溶液中消毒15分鐘，（此步以后要求無菌）用無菌水中沖洗5次，在滅菌的濾紙上吸干水分，放入滅菌的培養(yǎng)皿中。
⑵在雙目解剖鏡下，用滅菌的解剖針剝?nèi)ビ兹~露出生長錐，用滅菌的解剖針挑取帶著兩至三個葉原基的生長錐。
⑶將挑好的莖尖移到MS+10.7μmol/L萘乙酸(NAA)+4.4μmol/L6-芐基腺嘌呤（6-BA）的培養(yǎng)基上誘導(dǎo)愈傷組織形成，用封口膜將培養(yǎng)皿封好。
（4）在恒溫培養(yǎng)箱中，26℃下,培養(yǎng)六周，形成愈傷組織，經(jīng)繼代后，可用于生根培養(yǎng)
