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豬c-fos elisa酶聯(lián)免疫試劑盒操作流程

2019-11-22  閱讀(324)

                          豬c-fos elisa酶聯(lián)免疫試劑盒操作流程

十一月來了,看著它真年輕,年輕得讓我有些恍惚,恍惚著想起了過去,想起了你。不知此時(shí),可有人為你燃燈守望,可有人陪你圍爐取暖,可有人與你歲歲年年。接下來介紹豬c-fos elisa酶聯(lián)免疫試劑盒操作流程

 操作步驟:

1. 取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置 30 分鐘。

2. 分組:取出 96 孔板,根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組(6 個(gè)濃度)、空白孔、待測(cè)樣品組。

注:為減少實(shí)驗(yàn)誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔。

3. 加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入 100ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中;空白對(duì)照孔加入 100ul 的蒸餾水;其余微孔中加入100ul 的待測(cè)樣本。

4. 加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測(cè)樣本組各孔中加入 50ul 的酶標(biāo)溶液(空白對(duì)照孔除外)。

5. 溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育 1 小時(shí)。

6. 洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置 15-30s,充分清洗酶標(biāo)板 5 次,用吸水紙*拍干。

7. 顯色:各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后,再加入顯色劑 B 液 50ul。

8. 終止:25-37℃下避光反應(yīng) 10-15 分鐘,加入 50ul 終止液。

9. 讀板:在 450nm 波長(zhǎng)讀取各孔的 OD 值。

注意事項(xiàng):

1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。

3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,使用排槍加樣。

4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。

5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

6. 底物請(qǐng)避光保存。

7. 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。



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