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血清的制備與使用過(guò)程問(wèn)題解答

2021-6-23  閱讀(850)

血清的制備方法問(wèn)題

1、問(wèn):我的實(shí)驗(yàn)需要自己制備一些血清用于培養(yǎng)細(xì)胞,有沒(méi)有人知道用于培養(yǎng)細(xì)胞的血清需要怎樣的制備過(guò)程?

答:自己制備血清當(dāng)心污染啊。如果無(wú)菌條件好的話,用靜置析出方法就行。

2、問(wèn):一般我們用得胎牛血清用前還要滅活,我想用大鼠的血,不知道要不要滅活?

答:你直接把采來(lái)的血液在離心管里4℃過(guò)夜,離心,取上清,在無(wú)菌過(guò)濾,也可滅活,然后分裝凍存,用時(shí)再配。

3、問(wèn):如果滅活會(huì)不會(huì)對(duì)血清中的一些因子有損傷?

答:加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。激活的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在進(jìn)行免疫學(xué)研究、培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),使用熱滅活血清。滅活一般不會(huì)對(duì)血清中的一些因子損傷的。

心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)時(shí)血清的使用問(wèn)題

1、問(wèn):在進(jìn)行心肌細(xì)胞原代培養(yǎng)時(shí),需要用含血清的培養(yǎng)基中止的消化作用,我現(xiàn)在使用的是含血清10%的培養(yǎng)液,但近日看北醫(yī)一個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)的課件發(fā)現(xiàn),有用1%血清培養(yǎng)液進(jìn)行中止消化的,想問(wèn)一下,1%的是否可以,效果是否有保證?這樣確實(shí)能節(jié)省不少血清的。

答:關(guān)于心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)的FBS問(wèn)題:

1).1%的血清*培養(yǎng)基可不可以,得看你的用量。但是在心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)就不行。 10%的FBS*培養(yǎng)基效果都不太好,開(kāi)始心肌細(xì)胞元代培養(yǎng)需要高濃度的FBS,20%左右,但這就有出現(xiàn)另一個(gè)問(wèn)題,在FBS*培養(yǎng)基中,成纖維細(xì)胞呈優(yōu)勢(shì)細(xì)胞,須得在培養(yǎng)基加入適量的BrdU以抑制其生長(zhǎng),純化心肌細(xì)胞。

2).FBS的作用不僅僅是拿來(lái)中和,只是FBS中的一些蛋白質(zhì)如α-巨球蛋白等有抑制活性作用。

3).元代心肌細(xì)胞培養(yǎng)的FBS使用,有講究:剛開(kāi)始使用20%左右的高濃度的FBS,后逐漸遞減為無(wú)血清的DMEM/F-12培養(yǎng)基培養(yǎng)。

2、問(wèn):我的用量是0.08% ,并混和了0.08%的膠原酶。FBS要高濃度遞減是否是說(shuō)的在細(xì)胞培養(yǎng)中啊,難道在消化時(shí)終止也需要如此高的濃度嗎,還有,我的BRDU只用到48小時(shí)就不用了,因?yàn)閾?dān)心其損傷太大,可以持續(xù)用多久呢?

答:我用10%FBS終止的,然后差速1h,然后還是用10%FBS的HG-dmem養(yǎng)的,沒(méi)有用brdu,心肌細(xì)胞還是比較多和穩(wěn)定的,我第3天就可以用,第2天晚上看就會(huì)有搏動(dòng)。



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