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NAD蘋果酸酶測試盒50管/48樣分子生物試劑

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更新時間：2023-03-03 09:21:42瀏覽次數(shù)：335

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【簡單介紹】

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產(chǎn)品名稱：NAD蘋果酸酶測試盒50管/48樣
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣
檢測方法：紫外分光光度法
產(chǎn)品貨號：BJ-01S9549
商品介紹：

測定意義
ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細胞、動物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應，產(chǎn)生丙酮酸和CO2，以及伴隨NAD(P)+的還原反應，是蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來植物ME活性測定較多，已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同，可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。

測定原理：

NAD-ME催化NAD+還原成NADH，在340nm下測定NADH增加速率。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿和蒸餾水。

實驗結(jié)果判斷我有妙招：
1、定量測定結(jié)果根據(jù)標準曲線計算樣品中待測物的含量。產(chǎn)品僅用于科研
2、以樣品孔的OD值大于陰性對照OD值+2～3SD，作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P／N值(陽性孔OD值／陰性孔OD值)大于或等于2．1為陽性，P／N值小于2．1，但大于1．5為可疑，P／N小于1．5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測定性法：加入底物經(jīng)酶解和終止反應后，肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競爭法則淺于)陰性對照，與陰性對照的顏色接近者，判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求：
① 易揮發(fā)、低燃點的試劑要密封，放于陰涼、通風、遠離火源處保存。
② 與水蒸氣，水發(fā)生反應的物質(zhì)要密封，并遠離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑，應將其固體或晶體密封保存，不宜長期存放其水溶液，亞硫酸，氫硫酸溶液要密封存放，鉀，鈉，白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應的物質(zhì)要密封保存，其相應的溶液較固體更易反應，所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封，放于陰涼通風處保存。

優(yōu)點如下：
1、快速簡便：全程約50分鐘，可測100例左右樣本。
2、靈敏度高：IC50=0.05g/ml，是鄰苯三酚法的18倍。
3、穩(wěn)定性好：試劑盒2～8℃存放6個月有效。
4、再現(xiàn)性好：變異系數(shù)CV=1.7%。
5、回收試驗： X =103.3%。
6、受外界影響因素?。焊蓴_因素少，重復性強。

樣品制備：
1）. 直接或稀釋使用清亮無色中性液體樣品，體積可達2.000ml。
2）. 過濾混濁溶液。
3）. 除去樣品中的CO 2 （通過過濾）。
4 ）. 通過加氫氧化鉀或氫氧化鈉將酸性樣品的PH值調(diào)至8.0。
5 ）. 調(diào)整酸性淺色樣品的PH值至8.0，孵育約15分鐘。
6 ）. 用空白樣品做對照測定有色樣品（如有必要調(diào)整PH值至8.0）。
7 ）. 用PVPP（聚乙烯吡咯烷酮）或聚酰胺處理深色未經(jīng)稀釋或體積更大的樣品。
8 ）. 壓碎、攪勻固體或半固體樣品，用水溶解提取。
9 ）. 用Carrez試劑將含有蛋白質(zhì)的樣品去蛋白。
10）.含脂肪的樣品用熱水提取。

特點為：
（1）應用廣泛
由于各種各樣的無機物和有機物在紫外可見區(qū)都有吸收，因此均可借此法加以測定。到目前為止，幾乎化學元素周期表上的所有元素（除少數(shù)放射性元素和惰性元素之外）均可采用此法。
（2）靈敏度高
由于相應學科的發(fā)展，使新的有機顯色劑的合成和研究取得可喜的進展，從而對元素測定的靈敏度大大提高了一步。特別是由于多元絡合物和各種表面活性劑的應用研究，使許多元素的摩爾吸光系數(shù)由原來的幾萬提高到幾十萬。相對于其它痕量分析方法而言，光度法的精密度和準確度一致*是比較高的。不但在實際工作中光度法被廣泛采用，在標準參考物質(zhì)的研制中，它更受重視，很多光度分析法已制定成為標準方法。
（3）選擇性好
目前已有些元素只要利用控制適當?shù)娘@色條件就可直接進行光度法測定，如鈷、鈾、鎳、銅、銀、鐵等元素的測定，已有比較滿意的方法了。
（4）準確度高
對于一般的分光光度法來說，其濃度測量的相對誤差在1-3%范圍內(nèi)，如采用示差分光度法測量，則誤差往往可減少到千分之幾。
（5）適用濃度范圍廣
可從常量（1-50%）（尤其是使用示差法）到痕量（10-6-10-8%）（經(jīng)預富集后）。
（6）分析成本低、操作簡便、快速。
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