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上海邦景實業(yè)有限公司
主營產(chǎn)品： 進口elisa試劑盒，細胞株，細胞系，菌種 |
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- 聯(lián)系人：
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- 上海市閔行區(qū)碧泉路36弄銀宵大廈
- 郵編：
- 200000
- 網(wǎng)址：
- www.bhsy-e.com/
| 參考價 | ￥880 |
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型號
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 100ML | 880元 | 15 瓶 可售 |
更新時間：2024-03-13 16:30:47瀏覽次數(shù)：298
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iPS 細胞鋪底工作液
產(chǎn)品簡介：
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
iPS 細胞鋪底工作液 | 100ML | BJ-X2472 |
細胞培養(yǎng)具體步驟：
一、常用設備
1. 準備室的設備
單蒸餾水蒸餾器、雙蒸餾水蒸餾器、酸缸、烤箱、高壓鍋、儲品柜（放置未消毒物品）、儲品柜（放置消毒過的物品）、包裝臺。配液室的設備：扭力天平和電子天平（稱量藥品）、PH計（測量培養(yǎng)用液PH值）、磁力攪拌器（配置溶液室攪拌溶液）。
2. 培養(yǎng)室的設備
液氮罐、儲品柜（存放雜物）、日光燈和紫外燈、空氣凈化器系統(tǒng)、低溫冰箱（-80℃）、空調、二氧化碳缸瓶、邊臺（書寫實驗記錄）。
3. 必須放在無菌間的設備
離心機（收集細胞）、超凈工作臺、倒置顯微鏡、CO2孵箱（孵育培養(yǎng)物）、水浴鍋、三氧消毒殺菌機、4℃冰箱（放置serum和培養(yǎng)用液）。
二、無菌操作
（一）無菌室的滅菌
1.定期打掃無菌室：每周打掃一次，先用自來水拖地、擦桌子、超凈工作臺等，然后用3‰來蘇爾或新潔爾滅或0.5％過氧乙酸擦拭。
2.CO2孵箱（培養(yǎng)箱）滅菌：先用3‰新潔爾滅擦拭，然后用75％酒精擦拭或者0.5％過氧乙酸，再用紫外燈照射。
3.實驗前滅菌：打開紫外燈、三氧殺菌機、空氣凈化器系統(tǒng)各20-30分鐘。
4.實驗后滅菌：用75％酒精（3‰新潔爾滅）擦拭超凈臺、邊臺、倒置顯微鏡的載物臺。
細胞培養(yǎng)方法：
01 原代培養(yǎng)操作步驟
原代培養(yǎng)的操作步驟為：取材→分離→培養(yǎng)。
（1）取材：對于不同的組織有不同的取材方法，但均應保持材料的新鮮及嚴格無菌。
細胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：
（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和生長密度，當細胞生長密度達到80%~90%時，即可進行傳代。
（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。
（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶內加入適量含EDTA的，一般應覆蓋整個培養(yǎng)瓶底。
（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進行觀察，當發(fā)現(xiàn)有70%~80%細胞收縮變圓、細胞間隙變大時，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過度。
（5）吸出所有細胞懸液至離心管內，1000rpm/min離心3~5min。
（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細胞，輕輕吹打混勻，使細胞均勻分散。
（7）用吸頭吸取適量細胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。
（8）根據(jù)細胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間，甚至進行細胞凍存。
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注意事項：
（1）嚴格進行無菌操作，所用一切試劑及耗材均應無菌，且須在無菌超凈工作臺中紫外照射30min以上，以免細胞發(fā)生污染。
（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細胞生存和生長。來源于不同動物種類、組織類型的細胞，對培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時可用預實驗的方法選擇適當?shù)呐囵B(yǎng)液。
（3）胎牛血清對于維持細胞生存，促進細胞生長起著關鍵作用?？筛鶕?jù)文獻或預實驗選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應保持用至實驗完成。
（4）消化細胞時應避免消化時間過短導致消化不，收集到的細胞數(shù)量少，或消化時間過長導致細胞成團塊樣絮狀游離，這時的細胞已有損傷或死亡，影響細胞數(shù)量和實驗進度。
（5）細胞離心的時候應避免離心力過小收集的細胞數(shù)量不夠，或離心力過大對細胞產(chǎn)生損傷。離心后的細胞沉淀棄去上清后，應先彈散細胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打對細胞損傷小，可以提高細胞活率。
（6）吹打細胞時應盡量避免細胞的產(chǎn)生，以免損傷細胞，影響細胞狀態(tài)（吹打過程中殘留部分液體在吸頭內可以減少氣泡的產(chǎn)生）。
