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上海邦景實(shí)業(yè)有限公司
主營產(chǎn)品： 進(jìn)口elisa試劑盒，細(xì)胞株，細(xì)胞系，菌種 |
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商品屬性：
產(chǎn)品名稱：小鼠胚胎干細(xì)胞
貨號：BJ-X97728
規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
分類：原代細(xì)胞
商品介紹：
名稱 小鼠胚胎干細(xì)胞 3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 4.細(xì)胞簡介： 小鼠胚胎干細(xì)胞分離自囊胚胚胎組織；胚胎干細(xì)胞（Embryonic stem cell，ESCs，簡稱ES、EK或ESC細(xì)胞）是早期胚胎（原腸胚期之前）或原始性腺中分離出來的一類細(xì)胞，它具有體外培養(yǎng)無限增殖、自我更新和多向分化的特性。無論在體外還是體內(nèi)環(huán)境，ES細(xì)胞都能被誘導(dǎo)分化為機(jī)體幾乎所有的細(xì)胞類型。進(jìn)一步說，胚胎干細(xì)胞（ES細(xì)胞）是一種高度未分化細(xì)胞。它具有發(fā)育的全能性，能分化出成體動(dòng)物的所有組織和器官，包括生殖細(xì)胞。ES細(xì)胞具有與早期胚胎細(xì)胞相似的形態(tài)結(jié)構(gòu)，細(xì)胞核大，有一個(gè)或幾個(gè)核仁，胞核中多為常染色質(zhì)，胞質(zhì)胞漿少，結(jié)構(gòu)簡單。體外培養(yǎng)時(shí)，細(xì)胞排列緊密，呈集落狀生長。用堿性磷酸酶染色，ES細(xì)胞呈棕紅色，而周圍的成纖維細(xì)胞呈淡黃色。細(xì)胞克隆和周圍存在明顯界限，形成的克隆細(xì)胞彼此界限不清，細(xì)胞表面有折光較的脂狀小滴。細(xì)胞克隆形態(tài)多樣，多數(shù)呈島狀或巢狀。小鼠ES細(xì)胞的直徑7 微米～18 微米，豬、牛、羊ES細(xì)胞的顏色較深，直徑12 微米～18 微米。胚胎干細(xì)胞與普通細(xì)胞有顯著差別，有其特定的生長特性和特定的標(biāo)志，例如堿性磷酸酶活性非常高，帶有胚胎階段特異性表面抗原（ Stage- specific embryonic antigens,SSEA），人類胚胎干細(xì)胞還帶有高分子量的糖蛋白TRA1-60、TRA-1-81等標(biāo)志，這些特性和標(biāo)志均可以用于對胚胎干細(xì)胞進(jìn)行鑒定，除此之外，胚胎干細(xì)胞還可以在體外傳代，并保持正常核型。在體外培養(yǎng)體系中加入分化抑制劑如白血病抑制因子（ Leukaemia inhibitory factor,LF）或者在小鼠胚胎成纖維細(xì)胞飼養(yǎng)層（MEF）上培養(yǎng)時(shí)，胚胎干細(xì)胞都能呈克隆性增殖，長期保持核型正常和穩(wěn)定，凍存解凍也不影響不分化的特性。另外，胚胎干細(xì)胞還表現(xiàn)岀高水平端粒酶活性，目前證明端粒酶與細(xì)胞衰老密切相關(guān)，多數(shù)成熟細(xì)胞的端粒酶活性都很低。這些都是胚胎干細(xì)胞與成熟細(xì)胞不同的重要特點(diǎn)，也可能是其復(fù)制生命期限遠(yuǎn)比體細(xì)胞長的原因。 5.方法簡介： 公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胚胎干細(xì)胞采用分離囊胚組織，去除胚胎透明帶、使用特制專用培養(yǎng)基篩選培養(yǎng)，消化傳代純化制備而來，細(xì)胞總量約為5×105cells/瓶。 6.質(zhì)量檢測： 公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠胚胎干細(xì)胞經(jīng)Oct-4免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。 7.培養(yǎng)信息： 包被條件 明膠（0.1%） 培養(yǎng)基 含LIF、BMP、Penicillin、Streptomycin等 換液頻率 每2-3天換液一次； 生長特性 貼壁 細(xì)胞形態(tài) 短梭形、多角形 傳代特性 可傳5-8代左右 消化液 0.025% 培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5% |
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：產(chǎn)品僅用于科研
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
操作要點(diǎn)：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細(xì)胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶內(nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
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