土壤纖維素酶(Solid-cellulase,S-CL)活性測定試劑盒說明書
分光光度法 50管/24樣
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義:
S-CL主要來源于土壤微生物,S-CL催化農(nóng)作物秸稈產(chǎn)生的葡萄糖是主要的碳源營養(yǎng)物質(zhì)。
測定原理:
采用蒽酮比色法測定S-CL催化纖維素降解產(chǎn)生的還原糖的含量。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、甲苯、硫酸(不允許快遞)
和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
試劑一:甲苯10mL×1 瓶,4℃保存;(自備)
試劑二:液體6mL×1 瓶,4℃保存;
試劑三:液體40mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×1 瓶,4℃保存; 臨用前加入5mL 蒸餾水和45mL 濃硫酸充分溶解待用。
樣品處理:
新鮮土樣自然風(fēng)干或37 度烘箱風(fēng)干,過30~50 目篩。
加樣表和測定步驟:
對照管 測定管
風(fēng)干土樣(g) 0.1 0.1
試劑一 (μL) 100 100
振蕩混勻15min
試劑二(μL ) 180
試劑三(μL ) 740 740
蒸餾水(μL ) 360 180
37℃振蕩反應(yīng)3h 后,90℃水浴15min(蓋緊,防止水分散失),冷卻后
8000g 25℃離心10min,取上清,得糖化液
糖化液 (μL) 350 350
試劑四 (μL) 650 650
混勻, 90℃水浴10min(蓋緊,防止水分散失),冷卻,620nm 處蒸餾水調(diào)零,測定吸光值
A,計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設(shè)一個對照管。
S-CL 活力計算:
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y = 5.018x - 0.0462;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y 為吸光值。
單位的定義:每天每g 土樣中產(chǎn)生1mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。
S-CL 活力(mg/d/g)=(ΔA+0.0462) ÷5.018×V 反總÷W÷T =19.1×(ΔA+0.0462)
T:反應(yīng)時間,3h=1/8d; V 反總:反應(yīng)體系總體積:1.2mL;W:樣本質(zhì)量,0.1g。