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更新時(shí)間：2018-06-08 14:50:02瀏覽次數(shù)：279次
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一站式全血mRNAOUT 構(gòu)建cDNA文庫(kù)、蛋白質(zhì)的體外翻譯和RT-PCR方法檢測(cè)稀有的mRNA等研究常常 需要從總RNA中分離mRNA，mRNA只占總RNA的1%左右，但由于帶poly（A）尾巴， 所以可以通過(guò)與Oligo（dT） 纖維素的親和結(jié)合而與其他RNA（如rRNA、tRNA等）分離 開(kāi)。本產(chǎn)品專門(mén)用于從全血中一站式提取mRNA，其操作流程如下：
它具有下列特點(diǎn)：
1. 一站式，是由的高
一站式全血mRNAOUT
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
一站式全血mRNAOUT | 25次 | 1190元 |
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構(gòu)建cDNA文庫(kù)、蛋白質(zhì)的體外翻譯和RT-PCR方法檢測(cè)稀有的mRNA等研究常常 需要從總RNA中分離mRNA，mRNA只占總RNA的1%左右，但由于帶poly(A)尾巴， 所以可以通過(guò)與Oligo(dT) 纖維素的親和結(jié)合而與其他RNA（如rRNA、tRNA等）分離 開(kāi)。本產(chǎn)品專門(mén)用于從全血中一站式提取mRNA，其操作流程如下：
它具有下列特點(diǎn)：
1. 一站式，是由的高效、血液RNA提取試劑和mRNA提取試劑兩個(gè)產(chǎn)品整 合而成，即開(kāi)即用，非常方便。
2. 一次可以處理0.5-1.5 mL的全血，能得到約2-3 μg總RNA，其中1-5%為 mRNA。
3. 提供的Oligo(dT)纖維素吸附能力強(qiáng)，每克可以吸附50-80 OD的mRNA，相當(dāng) 于2000-3000 μ g mRNA。
4. mRNA提取過(guò)程操作簡(jiǎn)單，只需要離心就可以完成，免去了常規(guī)的灌柱、洗柱 等繁瑣操作，樣品也不會(huì)被稀釋。
5. 得到的mRNA可以直接用于構(gòu)建cDNA文庫(kù)、蛋白質(zhì)的體外翻譯和RT-PCR。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相， 離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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