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一站式全血mRNAOUT

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更新時間:2018-06-08 14:50:02瀏覽次數(shù):270次

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產(chǎn)品簡介

一站式全血mRNAOUT 構建cDNA文庫、蛋白質的體外翻譯和RT-PCR方法檢測稀有的mRNA等研究常常 需要從總RNA中分離mRNA,mRNA只占總RNA的1%左右,但由于帶poly(A)尾巴, 所以可以通過與Oligo(dT) 纖維素的親和結合而與其他RNA(如rRNA、tRNA等)分離 開。本產(chǎn)品專門用于從全血中一站式提取mRNA,其操作流程如下:
它具有下列特點:
1. 一站式,是由的高

詳細介紹

 

一站式全血mRNAOUT 

名稱

規(guī)格

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一站式全血mRNAOUT 

25次

1190元

 

構建cDNA文庫、蛋白質的體外翻譯和RT-PCR方法檢測稀有的mRNA等研究常常 需要從總RNA中分離mRNA,mRNA只占總RNA的1%左右,但由于帶poly(A)尾巴, 所以可以通過與Oligo(dT) 纖維素的親和結合而與其他RNA(如rRNA、tRNA等)分離 開。本產(chǎn)品專門用于從全血中一站式提取mRNA,其操作流程如下:
它具有下列特點:
1. 一站式,是由的高效、血液RNA提取試劑和mRNA提取試劑兩個產(chǎn)品整 合而成,即開即用,非常方便。
2. 一次可以處理0.5-1.5 mL的全血,能得到約2-3 μg總RNA,其中1-5%為 mRNA。
3. 提供的Oligo(dT)纖維素吸附能力強,每克可以吸附50-80 OD的mRNA,相當 于2000-3000  μ g mRNA。
4. mRNA提取過程操作簡單,只需要離心就可以完成,免去了常規(guī)的灌柱、洗柱 等繁瑣操作,樣品也不會被稀釋。
5. 得到的mRNA可以直接用于構建cDNA文庫、蛋白質的體外翻譯和RT-PCR。 

RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質分離,并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時,它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進入水相, 離心后可形成水相層和有機層,這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經(jīng)反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離,當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節(jié)其pH至中性時,變性的質粒DNA又恢復原來的構型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復性而形成纏連的網(wǎng)狀結構,通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
 相關產(chǎn)品列表:
無內毒素槍頭,200 μL
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4mLDNA超濾離心管(90-150KD)
4mLDNA超濾離心管(150-250KD)
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