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中提柱式BAC DNAout本產(chǎn)品是柱式BAC DNAOUT的中提升級(jí)產(chǎn)品,跟柱式BAC DNAOUT一樣,它采用了改良的細(xì)菌裂解和質(zhì)粒DNA上柱條件,確保大型的質(zhì)粒(大至100 Kb的質(zhì)粒)能有效地結(jié)合到硅膠柱中,并可高效地洗脫出來(lái)。其主要區(qū)別是一次的處理量增加了5-10倍。
1. 適用于不超過(guò)100 Kb的大型質(zhì)粒DNA,包括BAC、PAC、P1和Cosmid 等。如果超過(guò)100 Kb,建議使
中提柱式BAC DNAout
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
中提柱式BAC DNAout | 5次 | 詢價(jià) |
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本產(chǎn)品是柱式BAC DNAOUT的中提升級(jí)產(chǎn)品,跟柱式BAC DNAOUT一樣,它采用了改良的細(xì)菌裂解和質(zhì)粒DNA上柱條件,確保大型的質(zhì)粒(大至100 Kb的質(zhì)粒)能有效地結(jié)合到硅膠柱中,并可高效地洗脫出來(lái)。其主要區(qū)別是一次的處理量增加了5-10倍。
1. 適用于不超過(guò)100 Kb的大型質(zhì)粒DNA,包括BAC、PAC、P1和Cosmid 等。如果超過(guò)100 Kb,建議使用沉淀法或離子交換法。
2. 可從25 ml 細(xì)菌培養(yǎng)液中純化大型質(zhì)粒DNA。
3. 安全,無(wú)酚等危險(xiǎn)的有機(jī)物抽提。
4. 柱式操作,比經(jīng)典的沉淀法操作簡(jiǎn)單,重復(fù)性好,每次都能獲得理想效果。
5. 得到的DNA更純凈,可以直接用于酶切、PCR和DNA測(cè)序,不需要再純化。
6. *,性價(jià)比高。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過(guò)離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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