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更新時(shí)間：2018-06-12 13:25:01瀏覽次數(shù)：309次
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綠如藍(lán)核酸染料（UV）目前替代EB的SYBR系列核酸染料雖然毒性比EB低，靈敏度比EB高，但由于穩(wěn)定性差（怕光、怕水、怕熱），使得染色的重復(fù)性遠(yuǎn)不如EB。此外，用SYBR系列染料處理的核酸條帶很容易模糊和扭曲，所以它們?cè)趯?shí)際應(yīng)用中依然不能有效替代EB。本產(chǎn)品是具有EB所有優(yōu)點(diǎn)的無(wú)毒核酸染料，其特點(diǎn)如下：
1. 低毒，其有效成分未發(fā)現(xiàn)對(duì)人體有害、未被列入有毒有害品，有利于保護(hù)使用者的健康和保護(hù)日益惡
綠如藍(lán)核酸染料（UV）
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
綠如藍(lán)核酸染料（UV） | 0.5mL | 390元 |
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目前替代EB的SYBR系列核酸染料雖然毒性比EB低，靈敏度比EB高，但由于穩(wěn)定性差（怕光、怕水、怕熱），使得染色的重復(fù)性遠(yuǎn)不如EB。此外，用SYBR系列染料處理的核酸條帶很容易模糊和扭曲，所以它們?cè)趯?shí)際應(yīng)用中依然不能有效替代EB。本產(chǎn)品是具有EB所有優(yōu)點(diǎn)的無(wú)毒核酸染料，其特點(diǎn)如下：
1. 低毒，其有效成分未發(fā)現(xiàn)對(duì)人體有害、未被列入有毒有害品，有利于保護(hù)使用者的健康和保護(hù)日益惡化的環(huán)境。
2. 靈敏，靈敏度跟EB相當(dāng)。
3. 穩(wěn)定，穩(wěn)定性跟EB相當(dāng)。
4. 條帶穩(wěn)定均勻，不會(huì)發(fā)生SYBR染料常見的核酸條帶模糊和扭曲現(xiàn)象。
5. 使用方法多樣，跟EB一樣，既可以加入熔化的膠中，也可以電泳后染色。
6. 跟各種常用的TAE、TEB、SuperBuffer等兼容，不需要任何額外的儀器設(shè)備或UV光源。
7. 既可用于DNA，也可以用于RNA；既可用于瓊脂糖電泳，也可用于PAGE。
8. 在核酸濃度較高時(shí)還可以在日光下直接觀察到染色的條帶（需要黑色背景）。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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