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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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更新時(shí)間:2018-06-12 15:47:10瀏覽次數(shù):352次
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超級(jí)雜交液A(本系列產(chǎn)品是即用型核酸雜交液,可以用于各種條件下的合適、基于膜的雜交(包括Southern Blot和Northern Blot)。其特點(diǎn)是:核酸雜交一般是指用一種標(biāo)記的核酸探針與印跡膜上的核酸進(jìn)行雜交,由此檢測(cè)印跡膜上是否存在與探針同源的核酸分子(靶分子)。核酸雜交是分子生物學(xué)的基本技術(shù)之一,應(yīng)用非常廣泛。由于核酸雜交效率受印跡膜種類、雜交溫度、探針濃度、雜交液離子強(qiáng)度不含甲酰胺)
超級(jí)雜交液A(不含甲酰胺)
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
超級(jí)雜交液A(不含甲酰胺) | 100mL | 詢價(jià) |
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本系列產(chǎn)品是即用型核酸雜交液,可以用于各種條件下的合適、基于膜的雜交(包括Southern Blot和Northern Blot)。其特點(diǎn)是:核酸雜交一般是指用一種標(biāo)記的核酸探針與印跡膜上的核酸進(jìn)行雜交,由此檢測(cè)印跡膜上是否存在與探針同源的核酸分子(靶分子)。核酸雜交是分子生物學(xué)的基本技術(shù)之一,應(yīng)用非常廣泛。由于核酸雜交效率受印跡膜種類、雜交溫度、探針濃度、雜交液離子強(qiáng)度、雜交液pH及雜交液粘度等因素影響,用戶自己摸索和優(yōu)化相關(guān)條件非常繁瑣,因此本公司開發(fā)了本產(chǎn)品,它具有下列特點(diǎn):
1. 既可用于Southern雜交(靶分子為DNA),也可用于和Northern雜交(靶分子為RNA),還可以用于菌落雜交,基因芯片等雜交。
2. 既可以用于同位素探針的雜交,也可以用于非同位素探針的雜交。
3. 既可以使用DNA(包括DNA Oligo)探針,也可以使用RNA探針(包括RNA Oligo)
4. 含多種能夠促進(jìn)雜交的聚合物,使雜交反應(yīng)能在6~12小時(shí)完成,而常規(guī)雜交反應(yīng)一般需要12~24 小時(shí)。
5. 含多種封堵劑,能阻印跡膜對(duì)探針分子的非特異性吸附,能有效降低背景信號(hào),延長(zhǎng)曝光時(shí)間以便檢測(cè)到低拷貝的RNA(Northern)和單拷貝的基因(Southern)。
6. A型不含甲酰胺,B型含50%的甲酰胺。后者使雜交在較低溫度就可以完成,適合Tm較高的分子雜交(如RNA-RNA和RNA-DNA雜交)。
7. 跟各種常用的印跡膜兼容,包括硝酸纖維素膜和尼龍膜。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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