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天凈沙單細胞RNA擴增試劑盒

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產(chǎn)品簡介

天凈沙單細胞RNA擴增試劑盒一個哺乳動物單細胞一般只有約10pg的總RNA，其中的mRNA只有1-5%（約10E5-10E6個分子）,因此直接用單細胞進行mRNA擴增具有極大的技術難度。本公司進過精心研究，整合技術，開發(fā)出了可以直接用單個細胞進行mRNA擴增的試劑盒，本產(chǎn)品具有下列特點：
1. 雙向，既可用于制備正義的mRNA，也可用于制備反義的aRNA（antisense RNA）或cRN

詳細介紹

天凈沙單細胞RNA擴增試劑盒

名稱	規(guī)格	價格	手冊
天凈沙單細胞RNA擴增試劑盒	80次	詢價

一個哺乳動物單細胞一般只有約10pg的總RNA，其中的mRNA只有1-5%(約10E5-10E6個分子),因此直接用單細胞進行mRNA擴增具有極大的技術難度。本公司進過精心研究，整合技術，開發(fā)出了可以直接用單個細胞進行mRNA擴增的試劑盒，本產(chǎn)品具有下列特點：

1. 雙向，既可用于制備正義的mRNA，也可用于制備反義的aRNA（antisense RNA）或cRNA（complimenary RNA）。

2. 直接用單細胞裂解液進行反應，免RNA提取，整個過程只需要半天。

3. 適用于多種單細胞，包括卵細胞、干細胞、FACS分離細胞等單細胞，還可用于培養(yǎng)細胞和胚胎等實體租組織（需要單細胞化），也可以使用10pg-10ng純化的總RNA作為模板。

4. 假陰性和假陽性率均小于6%，RNA擴增成功率為90%。

5. 所得mRNA或aRNA（cRNA）可以直接用于后續(xù)的RT-PCR、芯片雜交、表達譜分析等實驗。

6. 本試劑盒足夠?qū)?0個單細胞進行單細胞RNA擴增。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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