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Rosetta-gami （DE3） 感受態(tài)細(xì)胞

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更新時間：2018-06-14 13:36:32瀏覽次數(shù)：270次

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產(chǎn)品簡介

Rosetta-gami （DE3） 感受態(tài)細(xì)胞Rosetta-gami（DE3）是常規(guī)表達(dá)宿主菌，用于含二硫鍵真核蛋白表達(dá)，細(xì)胞質(zhì)二硫化物還原途徑有兩個突變，可以增加E. coli 細(xì)胞質(zhì)中二硫鍵的形成。提供稀有密碼子 tRNAs?？剐詾樗沫h(huán)素 （12.5 µg/ml）、卡那霉素 （15 µg/ml） 、氯霉素 （34 µg/ml）。

詳細(xì)介紹

 

Rosetta-gami (DE3) 感受態(tài)細(xì)胞

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Rosetta-gami (DE3) 感受態(tài)細(xì)胞

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Rosetta-gami(DE3)是常規(guī)表達(dá)宿主菌，用于含二硫鍵真核蛋白表達(dá)，細(xì)胞質(zhì)二硫化物還原途徑有兩個突變，可以增加E. coli 細(xì)胞Rosetta-gami (DE3) 感受態(tài)細(xì)胞質(zhì)中二硫鍵的形成。提供稀有密碼子 tRNAs。抗性為四環(huán)素 (12.5 µg/ml)、卡那霉素 (15 µg/ml) 、氯霉素 (34 µg/ml)。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，Rosetta-gami (DE3) 感受態(tài)細(xì)胞離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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