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遺傳霉素（G418）干粉

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更新時間：2018-06-14 14:40:26瀏覽次數(shù)：294次

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產品簡介

遺傳霉素（G418）干粉G418又叫Geneticin（遺傳霉素），分子式為C20H40N4O10·2H2SO4，分子量為692.71，CAS號為108321-42-2，白色結晶，溶于水。在分子遺傳試驗中,是穩(wěn)定轉染較常用的抗性篩選試劑。
它通過干擾核糖體功能而阻斷蛋白質合成，對原核和真核細胞都有毒性。真核細胞中表達細菌APH（氨基糖苷磷酸轉移酶）的基因（源自Tn5），可使G418失去作用。

詳細介紹

遺傳霉素（G418）干粉

名稱	規(guī)格	價格	手冊
遺傳霉素（G418）干粉	100mg	詢價

G418又叫Geneticin（遺傳霉素），分子式為C20H40N4O10·2H2SO4，分子量為692.71，CAS號為108321-42-2，白色結晶，溶于水。在分子遺傳試驗中,是穩(wěn)定轉染常用的抗性篩選試劑。

它通過干擾核糖體功能而阻斷蛋白質合成，對原核和真核細胞都有毒性。真核細胞中表達細菌APH（氨基糖苷磷酸轉移酶）的基因(源自Tn5)，可使G418失去作用。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產物的電泳和結果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結合的技術。首先經(jīng)反轉錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質粒DNA是基于染色體DNA與質粒DNA的變性與復性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結構解開而變性。質粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調節(jié)其pH至中性時，變性的質粒DNA又恢復原來的構型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復性而形成纏連的網(wǎng)狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
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