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更新時(shí)間：2018-06-14 15:00:08瀏覽次數(shù)：469次
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AD494（DE3）大腸桿菌AD494菌株來(lái)源于K12菌，有助于蛋白的形成正確的三維結(jié)構(gòu)。AD494菌株含有thioredoxin reductase （TrxB）基因突變，有利于細(xì)菌胞內(nèi)的二硫鍵形成，能夠幫助蛋白形成正確的三維折疊，形成有功能活力的蛋白。AD494菌株中的thioredoxin reductase （TrxB）突變具有卡那霉素抗性，因此該宿主菌只能用于氨芐或者其他非卡那霉素抗性的
AD494(DE3)大腸桿菌
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
AD494(DE3)大腸桿菌 | 1 管 | 詢價(jià) |
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AD494菌株來(lái)源于K12菌，有助于蛋白的形成正確的三維結(jié)構(gòu)。AD494菌株含有thioredoxin reductase (TrxB)基因突變，有利于細(xì)菌胞內(nèi)的二硫鍵形成，能夠幫助蛋白形成正確的三維折疊，形成有功能活力的蛋白。AD494菌株中的thioredoxin reductase (TrxB)突變具有卡那霉素抗性，因此該宿主菌只能用于氨芐或者AD494(DE3)大腸桿菌其他非卡那霉素抗性的質(zhì)粒，進(jìn)行基因蛋白表達(dá)。 DE3是溶源性的 λDE3, 所以帶有T7 RNA聚合酶的染色體拷貝。該菌株適用于pET系列載體，及其他T7啟動(dòng)子系列載體。能夠利用IPTG直接進(jìn)行蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，AD494(DE3)大腸桿菌離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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