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更新時間：2018-06-14 15:03:04瀏覽次數(shù)：884次
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BL21大腸桿菌作為E.coli B宿主菌，BL21主要用來進(jìn)行蛋白表達(dá)，其細(xì)胞內(nèi)缺少lon蛋白酶和ompT外膜蛋白酶，能夠有效避免目的蛋白的降解。T7啟動子下游的目的蛋白在非DE3溶源宿主菌中，例如BL21菌株中，可以通過感染lambda （λ） CE6噬菌體而誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá)。lambda （λ） CE6能夠表達(dá)T7聚合酶，這能夠有效啟動T7啟動子下游基因的轉(zhuǎn)錄，所以可以誘導(dǎo)目
BL21大腸桿菌
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
BL21大腸桿菌 | 1 管 | 詢價 |
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作為E.coli B宿主菌，BL21主要用來進(jìn)行蛋白表達(dá)，其細(xì)胞內(nèi)缺少lon蛋白酶和ompT外膜蛋白酶，能夠有效避免目的蛋白的降解。T7啟動子下游的目的蛋白在非DE3溶源宿主菌中，例如BL21菌株中，可以通過感染lambda (λ) CE6噬菌體而誘導(dǎo)目的蛋白表達(dá)。lambda (λ) CE6能夠表達(dá)T7聚合酶，這能夠有效啟動T7啟動子下游基因的轉(zhuǎn)錄，所以可以誘導(dǎo)目的基因表達(dá)。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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生物素化兔IgG
生物素化山羊抗親和素
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*熱穩(wěn)定單鏈結(jié)合蛋白
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