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Rosetta-gami（DE3）plysS大腸桿菌

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更新時間：2018-06-14 15:37:27瀏覽次數(shù)：272次

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產(chǎn)品簡介

Rosetta-gami（DE3）plysS大腸桿菌Rosetta-gami（DE3）pLysS菌株來源于Rosetta-gami（DE3）菌株，同時集合了Origami（DE3）和Rosetta（DE3）的優(yōu)點，除具有Rosetta-gami（DE3）菌株的有點外，還含有pLySs質(zhì)粒。pLySs質(zhì)粒能夠產(chǎn)生T7溶菌酶，可以有效降低目的基因的基礎(chǔ)表達(dá)水平。pLySs質(zhì)粒的起始復(fù)制位點是p15 O

詳細(xì)介紹

Rosetta-gami(DE3)plysS大腸桿菌

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Rosetta-gami(DE3)plysS大腸桿菌	1 管	詢價

Rosetta-gami(DE3)pLysS菌株來源于Rosetta-gami(DE3)菌株，同時集合了Origami(DE3)和Rosetta(DE3)的優(yōu)點，除具有Rosetta-gami(DE3)菌株的有點外，還含有pLySs質(zhì)粒。pLySs質(zhì)粒能夠產(chǎn)生T7溶菌酶，可以有Rosetta-gami(DE3)plysS大腸桿菌效降低目的基因的基礎(chǔ)表達(dá)水平。pLySs質(zhì)粒的起始復(fù)制位點是p15 Origin, 這使得該質(zhì)粒能夠和pUC-及pBR322-衍生的質(zhì)?；ハ喙泊?。

Rosetta-gami(DE3)pLysS細(xì)胞同時具有氯霉素，卡那，鏈霉素和四環(huán)素四種抗生素抗性，被建議使用于含有Bla標(biāo)記的氨芐抗性表達(dá)質(zhì)粒。適用于pET系列載體及其他T7啟動子系列載體。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，Rosetta-gami(DE3)plysS大腸桿菌離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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