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更新時(shí)間：2018-06-15 13:49:11瀏覽次數(shù)：299次
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一站式MBP標(biāo)簽蛋白純化套裝MBP（麥芽糖結(jié)合蛋白，Maltose Binding Protein）標(biāo)簽蛋白大小為40kDa，由大腸桿菌K12的malE基因編碼。MBP可增加在細(xì)菌中過量表達(dá)的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在細(xì)菌中表達(dá)，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。MBP融合蛋白可通過交聯(lián)淀粉親和層析一步純化，結(jié)合的融合蛋白可用10mM麥芽糖在生理緩沖液中進(jìn)行洗脫。如果要去除MBP
一站式MBP標(biāo)簽蛋白純化套裝
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊 |
一站式MBP標(biāo)簽蛋白純化套裝 | 20次 | 1190元 |
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MBP（麥芽糖結(jié)合蛋白，Maltose Binding Protein）標(biāo)簽蛋白大小為40kDa，由大腸桿菌K12的malE基因編碼。MBP可增加在細(xì)菌中過量表達(dá)的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在細(xì)菌中表達(dá)，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。MBP融合蛋白可通過交聯(lián)淀粉親和層析一步純化，結(jié)合的融合蛋白可用10mM麥芽糖在生理緩沖液中進(jìn)行洗脫。如果要去除MBP融合部分，可用位點(diǎn)特異性蛋白酶切除?？捎肕BP抗體或表達(dá)的目的蛋白特異性抗體檢測MBP標(biāo)簽標(biāo)記的重組蛋白。由于MBP融合蛋白原核表達(dá)載體具有表達(dá)效率高，易于純化等優(yōu)點(diǎn)。在現(xiàn)代分子克隆中MBP常作為融合蛋白被廣泛應(yīng)用。本產(chǎn)品就是專門用于分離純化MBP融合蛋白的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：
1. 一站式套裝，含所需的直鏈淀粉和瓊脂糖介質(zhì)、溶液和層析柱，操作非常方便。
2. 專一性強(qiáng)，一次過柱即可獲得純度高達(dá)90%的MBP融合蛋白。
3. 采用麥芽糖溫和洗脫，無去污劑和變性劑對蛋白活性的影響。
4. 本介質(zhì)可以反復(fù)使用多次。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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