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BCA法蛋白定量試劑盒

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BCA法蛋白定量試劑盒本產(chǎn)品是基于BCA法（bicinchoninic acid，二奎啉甲酸法）蛋白檢測(cè)原理開(kāi)發(fā)的蛋白質(zhì)濃度測(cè)定產(chǎn)品，BCA法跟Lowry法的*步*相同，就是在堿性條件下，藍(lán)色的Cu2+被蛋白質(zhì)還原成紫色的Cu+。此反應(yīng)類(lèi)似Cu2+與Biuret（NH2-CO-NH-CO-NH2，雙縮脲）發(fā)生的反應(yīng)，故又叫Biuret反應(yīng)（Biuret反應(yīng)本身就可以測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，目前仍然是醫(yī)

詳細(xì)介紹

BCA法蛋白定量試劑盒

名稱(chēng)	規(guī)格	價(jià)格	手冊(cè)
BCA法蛋白定量試劑盒	500次	390元

本產(chǎn)品是基于BCA法（bicinchoninic acid，二奎啉甲酸法）蛋白檢測(cè)原理開(kāi)發(fā)的蛋白質(zhì)濃度測(cè)定產(chǎn)品，BCA法跟Lowry法的*步*相同，就是在堿性條件下，藍(lán)色的Cu2+被蛋白質(zhì)還原成紫色的Cu+。此反應(yīng)類(lèi)似Cu2+與Biuret（NH2-CO-NH-CO-NH2，雙縮脲）發(fā)生的反應(yīng)，故又叫Biuret反應(yīng)（Biuret反應(yīng)本身就可以測(cè)定蛋白質(zhì)濃度，目前仍然是醫(yī)院血液蛋白定量的方法）。第二步，Cu+與BCA發(fā)生反應(yīng)形成水溶性的紫色化合物，通過(guò)分光在562 nm處測(cè)定紫色化合物的量就可以精確定量蛋白質(zhì)濃度，增加BCA反應(yīng)這一步的原因是BCA檢測(cè)靈敏度比Biuret反應(yīng)高100倍左右。

1. 對(duì)大多數(shù)離子型和非離子型去污劑不敏感，但對(duì)Cu的還原劑和螯合劑敏感。

2. 比Lowry法更加簡(jiǎn)單快捷，45分鐘內(nèi)完成測(cè)定。

3. 試劑穩(wěn)定，室溫可以放置兩年，工作液1天內(nèi)有效。

4. 線性范圍在 20-2000 μg/mL（對(duì)BSA）。

5. 小測(cè)量體積為1-20 μL。低測(cè)量蛋白量為5 μg/mL。

6. 終產(chǎn)物穩(wěn)定，檢測(cè)不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬斯亮藍(lán)法蛋白定量。

7. 短可以檢測(cè)雙肽，所以適合于分子量較小的蛋白質(zhì)，而B(niǎo)radford法需要一定大小的蛋白質(zhì)。

8. 有常規(guī)（普通試管）和微量（96孔板）兩種檢測(cè)模式。

RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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