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微量蛋白沉淀試劑盒

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產(chǎn)品簡(jiǎn)介

微量蛋白沉淀試劑盒本產(chǎn)品用于沉淀濃縮微量蛋白質(zhì)樣品,并在此過(guò)程中去除掉蛋白質(zhì)樣品中的干擾下一步實(shí)驗(yàn)的物質(zhì),其原理是通過(guò)酸性有機(jī)溶劑使蛋白質(zhì)變性,溶解度降低,在離心條件下沉淀,而達(dá)到沉淀濃縮的目的。它具有下列特點(diǎn):
1. 方便,即開(kāi)即用,不需要單獨(dú)準(zhǔn)備試劑,優(yōu)化條件。

詳細(xì)介紹

 

微量蛋白沉淀試劑盒

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規(guī)格

價(jià)格

手冊(cè)

微量蛋白沉淀試劑盒

50次

590元

 

本產(chǎn)品用于沉淀濃縮微量蛋白質(zhì)樣品,并在此過(guò)程中去除掉蛋白質(zhì)樣品中的干擾下一步實(shí)驗(yàn)的物質(zhì),其原理是通過(guò)酸性有機(jī)溶劑使蛋白質(zhì)變性,溶解度降低,在離心條件下沉淀,而達(dá)到沉淀濃縮的目的。它具有下列特點(diǎn):

1. 方便,即開(kāi)即用,不需要單獨(dú)準(zhǔn)備試劑,優(yōu)化條件。

2. 快速,整個(gè)過(guò)程可以在一小時(shí)內(nèi)完成。

3. 靈敏度高,能濃縮蛋白質(zhì)總量只有1 μg的蛋白質(zhì)(在200 μL體系中),得到的蛋白沉淀可以溶解在任何體積的自備后續(xù)緩沖液中。

4. 去污染效果好,能有效去除污染的鹽離子、還原劑、去污劑、Ampholine等小分子,可用于許多實(shí)驗(yàn)的預(yù)處理,便于下一步操作。

5. 與多種后續(xù)試驗(yàn)兼容,本方法與SDS-PAGE、2D電泳、等電點(diǎn)電泳(IEF)、各種方法的蛋白定量、胰蛋白酶酶切等后續(xù)實(shí)驗(yàn)兼容,得到的蛋白質(zhì)可以直接用于上述實(shí)驗(yàn)。

RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過(guò)離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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