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更新時(shí)間：2018-06-15 15:54:33瀏覽次數(shù)：349次
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非變性法蛋白沉淀本產(chǎn)品是基于蛋白質(zhì)鹽析和透析原理開(kāi)發(fā)的蛋白質(zhì)濃縮產(chǎn)品。其原理是將大量具有很強(qiáng)水化能力的硫酸銨加到蛋白質(zhì)溶液中，奪取蛋白質(zhì)分子的水化層（尤其是蛋白質(zhì)表面非極性區(qū)的水化層），使之“失水"，于是蛋白質(zhì)分子間的非極性基團(tuán)將互相結(jié)合，使蛋白質(zhì)形成沉淀，離心分離沉淀后，再用透析方法將蛋白質(zhì)中的鹽除去，即得濃縮的蛋白質(zhì)。
非變性法蛋白沉淀
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
非變性法蛋白沉淀 | 10次 | 1990元 |
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本產(chǎn)品是基于蛋白質(zhì)鹽析和透析原理開(kāi)發(fā)的蛋白質(zhì)濃縮產(chǎn)品。其原理是將大量具有很強(qiáng)水化能力的硫酸銨加到蛋白質(zhì)溶液中，奪取蛋白質(zhì)分子的水化層（尤其是蛋白質(zhì)表面非極性區(qū)的水化層），使之“失水”，于是蛋白質(zhì)分子間的非極性基團(tuán)將互相結(jié)合，使蛋白質(zhì)形成沉淀，離心分離沉淀后，再用透析方法將蛋白質(zhì)中的鹽除去非變性法蛋白沉淀，即得濃縮的蛋白質(zhì)。
本產(chǎn)品以鹽析能力強(qiáng)的硫酸銨作為蛋白質(zhì)的沉淀劑，其特點(diǎn)是：
1. 適合于濃縮各種蛋白質(zhì)粗提液。
2. 非變性法，不會(huì)破壞蛋白質(zhì)的天然結(jié)構(gòu)和活性，尤其是適用于對(duì)變性敏感的酶溶液。
3. 得到的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，適合于長(zhǎng)期保存。
4. 可以在透析是進(jìn)行緩沖液的調(diào)換。
5. 一站式，帶有鹽析和透析所需的物品。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，非變性法蛋白沉淀離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
非變性法蛋白沉淀相關(guān)產(chǎn)品列表：
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pLVX-mCherry-N1
pLVX-PAmCherry-C1
pLVX-PAmCherry-N1
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pLVX-Tet-On-Advance
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pMA09-J
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pMA5MCS
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pMA-27s-2
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