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一管式TMB顯色液A (可溶型)

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一管式TMB顯色液A (可溶型) 四甲基聯(lián)苯胺,即TMB(3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine),是辣根過(guò)氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)的顯色底物,在辣根過(guò)氧化物酶和H2O2存在時(shí),TMB會(huì)產(chǎn)生可溶性藍(lán)色產(chǎn)物(光吸收在370 nm),加入硫酸后,溶液呈黃色,此時(shí)可以在450 nm測(cè)定吸光度,因此TMB和H2O2一起常用于檢測(cè)HRP的存在。跟

詳細(xì)介紹

 

一管式TMB顯色液A (可溶型) 

名稱(chēng)

規(guī)格

價(jià)格

手冊(cè)

一管式TMB顯色液A (可溶型) 

100mL

詢(xún)價(jià)

 

四甲基聯(lián)苯胺,即TMB(3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine),是辣根過(guò)氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)的顯色底物,在辣根過(guò)氧化物酶和H2O2存在時(shí),TMB會(huì)產(chǎn)生可溶性藍(lán)色產(chǎn)物(光吸收在370 nm),加入硫酸后,溶液呈黃色,此時(shí)可以在450 nm測(cè)定吸光度,因此TMB和H2O2一起常用于檢測(cè)HRP的存在。跟HRP的其他底物(如ABTS和OPD)相比,TMB不但靈敏,而且無(wú)毒,所以在ELISA中的應(yīng)用日趨廣泛。一管式TMB顯色液A (可溶型) 傳統(tǒng)的TMB顯色試劑一般由兩組份組成(另一個(gè)是H2O2),必須在使用前新鮮配制,并且容易產(chǎn)生沉淀,使用相對(duì)不太方便,并且也容易導(dǎo)致操作誤差。為克服這些缺點(diǎn),本公司開(kāi)發(fā)了只有一個(gè)溶液的TMB顯色液,它具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,操作簡(jiǎn)單,用戶(hù)不需要配制任何溶液。
2. 顯色液只是單一溶液,簡(jiǎn)化了操作步驟,降低了操作誤差,結(jié)果更加穩(wěn)定。
3. 既可用于ELISA等的顯色液,也可以用于檢測(cè)血液或血紅蛋白等樣品中的過(guò)氧化物酶含量。
4. 該底物溶液含TMB、H2O2和特殊的穩(wěn)定劑,可以在4℃長(zhǎng)期放置。
5. 分沉淀可溶型(A型,適用于ELISA)和沉淀不可溶型(B型,適用于Western免疫檢測(cè))兩種。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,一管式TMB顯色液A (可溶型) 離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過(guò)離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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