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更新時(shí)間：2018-06-19 13:01:30瀏覽次數(shù)：309次
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一管式TMB顯色液A （可溶型） 四甲基聯(lián)苯胺，即TMB（3，3′，5，5′-Tetramethylbenzidine），是辣根過(guò)氧化物酶（Horseradish Peroxidase，HRP）的顯色底物，在辣根過(guò)氧化物酶和H2O2存在時(shí)，TMB會(huì)產(chǎn)生可溶性藍(lán)色產(chǎn)物（光吸收在370 nm），加入硫酸后，溶液呈黃色，此時(shí)可以在450 nm測(cè)定吸光度，因此TMB和H2O2一起常用于檢測(cè)HRP的存在。跟
一管式TMB顯色液A (可溶型)
名稱(chēng) | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
一管式TMB顯色液A (可溶型) | 100mL | 詢(xún)價(jià) |
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四甲基聯(lián)苯胺，即TMB(3，3′，5，5′-Tetramethylbenzidine)，是辣根過(guò)氧化物酶（Horseradish Peroxidase，HRP）的顯色底物，在辣根過(guò)氧化物酶和H2O2存在時(shí)，TMB會(huì)產(chǎn)生可溶性藍(lán)色產(chǎn)物(光吸收在370 nm)，加入硫酸后，溶液呈黃色，此時(shí)可以在450 nm測(cè)定吸光度，因此TMB和H2O2一起常用于檢測(cè)HRP的存在。跟HRP的其他底物（如ABTS和OPD）相比，TMB不但靈敏，而且無(wú)毒，所以在ELISA中的應(yīng)用日趨廣泛。一管式TMB顯色液A (可溶型) 傳統(tǒng)的TMB顯色試劑一般由兩組份組成(另一個(gè)是H2O2)，必須在使用前新鮮配制，并且容易產(chǎn)生沉淀，使用相對(duì)不太方便，并且也容易導(dǎo)致操作誤差。為克服這些缺點(diǎn)，本公司開(kāi)發(fā)了只有一個(gè)溶液的TMB顯色液，它具有下列特點(diǎn)：
1. 即開(kāi)即用，操作簡(jiǎn)單，用戶(hù)不需要配制任何溶液。
2. 顯色液只是單一溶液，簡(jiǎn)化了操作步驟，降低了操作誤差，結(jié)果更加穩(wěn)定。
3. 既可用于ELISA等的顯色液，也可以用于檢測(cè)血液或血紅蛋白等樣品中的過(guò)氧化物酶含量。
4. 該底物溶液含TMB、H2O2和特殊的穩(wěn)定劑，可以在4℃長(zhǎng)期放置。
5. 分沉淀可溶型（A型，適用于ELISA）和沉淀不可溶型（B型，適用于Western免疫檢測(cè)）兩種。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，一管式TMB顯色液A (可溶型) 離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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