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更新時間：2018-06-19 14:27:44瀏覽次數(shù)：242次
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細(xì)胞核微量制備試劑盒用高密度介質(zhì)來分離動物軟體組織（如肝臟、脾臟等）細(xì)胞核是目前主流的方法，它是由Chauveau于1956年發(fā)明，其原理是細(xì)胞核的密度較大，在高速離心條件下可在高密度介質(zhì)中沉降下來，從而達(dá)到與細(xì)胞質(zhì)其它成分分開的目的。該方法能通過一步離心得到較高純度的細(xì)胞核，得到廣泛應(yīng)用。本產(chǎn)品就是在Chauveau方法的基礎(chǔ)上優(yōu)化改進(jìn)而來，它具有下列特點：
1. 基于密度梯度分離，可有效去除細(xì)
細(xì)胞核微量制備試劑盒
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
細(xì)胞核微量制備試劑盒 | 50次 | 590元 |
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用高密度介質(zhì)來分離動物軟體組織（如肝臟、脾臟等）細(xì)胞核是目前主流的方法，它是由Chauveau于1956年發(fā)明，其原理是細(xì)胞核的密度較大，在高速離心條件下可在高密度介質(zhì)中沉降下來，從而達(dá)到與細(xì)胞質(zhì)其它成分分開的目的。該方法能通過一步離心得到較高純度的細(xì)胞核，得到廣泛應(yīng)用。本產(chǎn)品就是在Chauveau方法的基礎(chǔ)上優(yōu)化改進(jìn)而來，它具有下列特點：
1. 基于密度梯度分離，可有效去除細(xì)胞質(zhì)及其他細(xì)胞器，得到的細(xì)胞核純凈。
2. 加入了可以改變分離介質(zhì)滲透壓的物質(zhì)，減少了細(xì)胞核的脆性，增加了細(xì)胞核的完整性。
3. 精心調(diào)節(jié)了介質(zhì)的pH，防止細(xì)胞核在分離過程中的聚集，還能保持細(xì)胞核的精細(xì)結(jié)構(gòu)。
4. 快速，整個操作過程僅需1小時即可完成（對一個樣品而言）。
5. 提供染色試劑，可以在普通光學(xué)顯微鏡下檢測純化的細(xì)胞核的純度。
6. 處理溫和，得到的細(xì)胞核中的大部分蛋白質(zhì)都具有活性，可以用于膠遲阻實驗、酶活性分析細(xì)胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學(xué)等的研究；也可用于超大片段DNA的純化。
7. 不但適用于動物和植物培養(yǎng)細(xì)胞，還能用于實體組織（能用Dounce或Potter勻漿器勻漿的組織均可）。
8. 一次微量提取足夠處理0.1 g組織或5×107個培養(yǎng)細(xì)胞，本產(chǎn)品足夠50次細(xì)胞核微量提取。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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