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更新時間：2018-06-19 14:34:56瀏覽次數(shù)：724次
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阿爾瑪藍細胞增殖與細胞毒檢測試劑阿爾瑪藍（Alamar Blue ）也稱刃天青（Resazurin）、天蘭化鈉，樹脂天青）是一種安全，無毒的藍色染料。加入培養(yǎng)液中，可作為氧分子電子傳遞鏈的受體，呈現(xiàn)由藍向紅轉(zhuǎn)變的顏色變化，反映所研究的細胞或微生物對氧分子的消耗，因而常被用作氧化還原指示劑，以顯示被觀察細胞和細菌的代謝活動。阿爾瑪藍的顏色改變可用光度計測定。阿爾瑪藍的粉紅色細胞代謝產(chǎn)物 也可用熒光檢
阿爾瑪藍細胞增殖與細胞毒檢測試劑
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
阿爾瑪藍細胞增殖與細胞毒檢測試劑 | 500次 | 詢價 |
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阿爾瑪藍（Alamar Blue ）也稱刃天青（Resazurin）、天蘭化鈉，樹脂天青）是一種安全，無毒的藍色染料。加入培養(yǎng)液中，可作為氧分子電子傳遞鏈的受體，呈現(xiàn)由藍向紅轉(zhuǎn)變的顏色變化，反映所研究的細胞或微生物對氧分子的消耗，因而常被用作氧化還原指示劑，以顯示被觀察細胞和細菌的代謝活動。阿爾瑪藍的顏色改變可用光度計測定。阿爾瑪藍的粉紅色細胞代謝產(chǎn)物 也可用熒光檢測，其激發(fā)光波長在530-560 nm之間，發(fā)射光波長為590 nm。實驗可以在微孔板中進行，如果用酶標儀檢測結(jié)果，不僅檢測操作更加簡便，快速，而且可以對細胞和細菌的數(shù)量進行定量分析以及藥物高通量篩選（High Throughput Screening, HTS），因此是一種簡便、快捷、敏感、高效、安全而又經(jīng)濟的檢測方法,可廣泛地用于細胞增殖代謝，藥物的細胞毒作用的體外測定以及病原微生物的的快速檢測與鑒定。與臺盼蘭、TTC、MTT、MTS等分析法相比，阿爾瑪藍法具有更多的優(yōu)勢。阿爾瑪藍法采用單一試劑，可以連續(xù)、快速地檢測細胞的增生狀態(tài)。由于阿爾瑪藍對細胞無毒、無害，不影響細胞的抗體合成與分泌等活性，因此可以對同一批細胞的增生狀態(tài)進行連續(xù)觀察和進一步的實驗觀察，因此有操作簡便和幾乎不干擾細胞正常代謝的特點。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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