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一站式生物素檢測(cè)TUNEL試劑盒（DAB法）

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一站式生物素檢測(cè)TUNEL試劑盒（DAB法）TUNEL全稱末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP切口及末端標(biāo)記（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling），它是一種高靈、敏度、快速檢測(cè)細(xì)胞凋亡的方法。其原理是在發(fā)生凋亡細(xì)胞中會(huì)有大量的具有切口的DNA片段、或具有游離3'-OH端、長(zhǎng)度是180-200 bp倍數(shù)的DNA片段， TdT（Terminal Deoxynucleo

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一站式生物素檢測(cè)TUNEL試劑盒（DAB法）

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一站式生物素檢測(cè)TUNEL試劑盒（DAB法）	10次	980元

TUNEL全稱末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的dUTP切口及末端標(biāo)記（TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling），它是一種高靈、敏度、快速檢測(cè)細(xì)胞凋亡的方法。其原理是在發(fā)生凋亡細(xì)胞中會(huì)有大量的具有切口的DNA片段、或具有游離3'-OH端、長(zhǎng)度是180-200 bp倍數(shù)的DNA片段， TdT（Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, 末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶）可以以不依賴模板的方式進(jìn)行標(biāo)記，如參入熒光素、生物素或等標(biāo)記的dUTP，而正常細(xì)胞DNA幾乎沒(méi)有游離的3'-OH和切口，所以通過(guò)對(duì)標(biāo)記物的顯色反應(yīng)和熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀檢測(cè)就可以區(qū)分正常和凋亡的細(xì)胞。本試劑盒有如下特點(diǎn)：
1. 一站式，不需要額外準(zhǔn)備專用的試劑（但客戶還是需要自備常規(guī)的試劑，如水、PBS和細(xì)胞涂片所需試劑）。
2. 高靈敏度，可以在單細(xì)胞水平檢測(cè)到細(xì)胞凋亡，適合檢測(cè)早期的細(xì)胞凋亡。
3. 特異性高，只標(biāo)記凋亡細(xì)胞，而不標(biāo)記壞死細(xì)胞。
4. 快速，整個(gè)操作過(guò)程僅需1-2個(gè)小時(shí)即可完成。
5. 方便，一步染色反應(yīng)，洗滌后即可觀察，不必使用二抗等進(jìn)行多步操作。
6. 適用于組織樣本（石蠟包埋、冰凍和超薄切片）和細(xì)胞樣本（細(xì)胞涂片）。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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