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雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

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雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一,它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面起著十分重要的作用。在細(xì)胞凋亡過(guò)程中,細(xì)胞內(nèi)膜的磷酯酰絲氨酸外翻到細(xì)胞外膜,而Annexin V(膜聯(lián)蛋白V)對(duì)其有天然的高親和能力,故可以用FITC標(biāo)記(綠色熒光)的Annexin V來(lái)檢測(cè)細(xì)胞凋亡,但本方法的缺點(diǎn)是不能區(qū)分早期和晚期的凋亡細(xì)胞。早期和晚期的凋亡細(xì)胞的一個(gè)重要區(qū)別在于細(xì)胞膜的完整性

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雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

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雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒

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細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一,它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面起著十分重要的作用。在細(xì)胞凋亡過(guò)程中,細(xì)胞內(nèi)膜的磷酯酰絲氨酸外翻到細(xì)胞外膜,而Annexin V(膜聯(lián)蛋白V)對(duì)其有天然的高親和能力,故可以用FITC標(biāo)記(綠色熒光)的Annexin V來(lái)檢測(cè)細(xì)胞凋亡,但本方法的缺點(diǎn)是不能區(qū)分早期和晚期的凋亡細(xì)胞。早期和晚期的凋亡細(xì)胞的一個(gè)重要區(qū)別在于細(xì)胞膜的完整性(凋亡早期細(xì)胞沒(méi)有喪失膜的完整性),故可以用碘化丙啶(Propidium Iodide,PI)來(lái)染色加以區(qū)分。本產(chǎn)品就是整合了上述兩種方法的高靈敏的細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒,具有下列特點(diǎn):
1. 即開(kāi)即用,不需要專門花時(shí)間準(zhǔn)備各種成分。
2. 整合了Annexin V-FITC和PI檢測(cè)法的優(yōu)點(diǎn),提高了凋亡細(xì)胞檢測(cè)的靈敏度和特異性,本方法是目前靈敏的細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法。
3. 跟流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測(cè)兼容。
4. 本產(chǎn)品適用于培養(yǎng)細(xì)胞(懸浮或貼壁),不適用于組織樣品。
RNA提取法:試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RNA與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí),它可抽提酸性的苯酚,而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟:
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA,再以cDNA為模板,擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中,每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下,染色體DNA的氫鍵斷裂,雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂,但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離,當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí),變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型,保存在溶液中,而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu),通過(guò)離心,染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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