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雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面起著十分重要的作用。在細(xì)胞凋亡過程中，細(xì)胞內(nèi)膜的磷酯酰絲氨酸外翻到細(xì)胞外膜，而Annexin V（膜聯(lián)蛋白V）對(duì)其有天然的高親和能力，故可以用FITC標(biāo)記（綠色熒光）的Annexin V來檢測(cè)細(xì)胞凋亡，但本方法的缺點(diǎn)是不能區(qū)分早期和晚期的凋亡細(xì)胞。早期和晚期的凋亡細(xì)胞的一個(gè)重要區(qū)別在于細(xì)胞膜的完整性
雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
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雙染細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 | 50次 | 詢價(jià) |
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細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的基本特征之一，它在機(jī)體的胚胎發(fā)育、組織修復(fù)、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定等方面起著十分重要的作用。在細(xì)胞凋亡過程中，細(xì)胞內(nèi)膜的磷酯酰絲氨酸外翻到細(xì)胞外膜，而Annexin V（膜聯(lián)蛋白V）對(duì)其有天然的高親和能力，故可以用FITC標(biāo)記（綠色熒光）的Annexin V來檢測(cè)細(xì)胞凋亡，但本方法的缺點(diǎn)是不能區(qū)分早期和晚期的凋亡細(xì)胞。早期和晚期的凋亡細(xì)胞的一個(gè)重要區(qū)別在于細(xì)胞膜的完整性（凋亡早期細(xì)胞沒有喪失膜的完整性），故可以用碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）來染色加以區(qū)分。本產(chǎn)品就是整合了上述兩種方法的高靈敏的細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒，具有下列特點(diǎn)：
1. 即開即用，不需要專門花時(shí)間準(zhǔn)備各種成分。
2. 整合了Annexin V-FITC和PI檢測(cè)法的優(yōu)點(diǎn)，提高了凋亡細(xì)胞檢測(cè)的靈敏度和特異性，本方法是目前靈敏的細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法。
3. 跟流式細(xì)胞儀、熒光顯微鏡或其它熒光檢測(cè)兼容。
4. 本產(chǎn)品適用于培養(yǎng)細(xì)胞（懸浮或貼壁），不適用于組織樣品。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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