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熒光染色細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒活細(xì)胞透過(guò)性熒光染料Hoechst 33342在凋亡細(xì)胞中的熒光強(qiáng)度增高的機(jī)制與凋亡細(xì)胞膜通透性發(fā)生改變有關(guān)，凋亡細(xì)胞早期細(xì)胞膜的完整性沒(méi)有明顯性改變，但細(xì)胞膜的通透性已有增強(qiáng)，因此進(jìn)入凋亡細(xì)胞中的Hoechst 33342比正常細(xì)胞的多。此外，還與凋亡細(xì)胞的染色體DNA的結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變從而使該染料能更有效地與DNA結(jié)合以及凋亡細(xì)胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到損傷不能有效地
熒光染色細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒
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熒光染色細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 | 200次 | 詢價(jià) |
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活細(xì)胞透過(guò)性熒光染料Hoechst 33342在凋亡細(xì)胞中的熒光強(qiáng)度增高的機(jī)制與凋亡細(xì)胞膜通透性發(fā)生改變有關(guān)，凋亡細(xì)胞早期細(xì)胞膜的完整性沒(méi)有明顯性改變，但細(xì)胞膜的通透性已有增強(qiáng)，因此進(jìn)入凋亡細(xì)胞中的Hoechst 33342比正常細(xì)胞的多。此外，還與凋亡細(xì)胞的染色體DNA的結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變從而使該染料能更有效地與DNA結(jié)合以及凋亡細(xì)胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到損傷不能有效地將Hoechst 33342排出到細(xì)胞外使之在細(xì)胞內(nèi)積累增加等有關(guān)。Hoechst 33342進(jìn)入凋亡細(xì)胞中比正常細(xì)胞更容易，而EB、PI或7-AAD等染料是不能進(jìn)入細(xì)胞膜完整的活細(xì)胞中，即正常細(xì)胞和凋亡細(xì)胞在不經(jīng)固定的情況下對(duì)這些染料是拒染，壞死細(xì)胞由于膜完整性在早期即已破損，可被這些染料染色。
本試劑盒就是采用Hoechst 33342與另一種活細(xì)胞非透過(guò)性熒光染料碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)，直接對(duì)活細(xì)胞的染色體DNA進(jìn)行特異性熒光染色。在熒光顯微鏡下觀察，可見(jiàn)凋亡細(xì)胞明亮的藍(lán)色細(xì)胞核熒光著色，而正常細(xì)胞著色很淺，壞死細(xì)胞則會(huì)被PI著色產(chǎn)生紅色熒光，從而區(qū)分出凋亡和壞死細(xì)胞。熒光染色的培養(yǎng)細(xì)胞也可直接用于流式細(xì)胞分析，是一種快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)典的細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法。該產(chǎn)品特點(diǎn)如下：
1．特異性強(qiáng)：利用凋亡細(xì)胞的包膜結(jié)構(gòu)完整性和核形態(tài)特征性改變區(qū)分凋亡和壞死
細(xì)胞
2．快速簡(jiǎn)便：適合高通量篩選
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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