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更新時(shí)間：2018-06-19 15:32:34瀏覽次數(shù)：523次
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克必隆RACE試劑盒 本產(chǎn)品是常規(guī)5′-RACE試劑盒的改良版，主要特點(diǎn)是整合了本公司的Enhanced Template Switch（eTS，增強(qiáng)型模板轉(zhuǎn)換）技術(shù)和單細(xì)胞RNA擴(kuò)增技術(shù)，改良后的本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：
1. 整合的eTS技術(shù)極大提高了獲得5′端全長(zhǎng)的cDNA機(jī)率。
克必隆RACE試劑盒
名稱 | 規(guī)格 | 價(jià)格 | 手冊(cè) |
克必隆RACE試劑盒 | 10次 | 詢價(jià) |
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本產(chǎn)品是常規(guī)5′-RACE試劑盒的改良版，主要特點(diǎn)是整合了本公司的Enhanced Template Switch（eTS，增強(qiáng)型模板轉(zhuǎn)換）技術(shù)和單細(xì)胞RNA擴(kuò)增技術(shù)，改良后的本產(chǎn)品具有下列特點(diǎn)：
1. 整合的eTS技術(shù)極大提高了獲得5′端全長(zhǎng)的cDNA機(jī)率。
2. 整合的單細(xì)胞RNA擴(kuò)增技術(shù)使總RNA的低使用量可以降低到ng級(jí)。
3. 提供常規(guī)和超敏兩種使用模式，前者在逆轉(zhuǎn)錄后直接進(jìn)行RACE擴(kuò)增，適用于ug級(jí)總RNA；后者是在逆轉(zhuǎn)錄后*行無(wú)選擇性cDNA擴(kuò)增，再進(jìn)行RACE擴(kuò)增，適用于ng級(jí)總RNA。
4. 逆轉(zhuǎn)錄和加尾一管式完成，免去繁瑣的優(yōu)化步驟和在純化過(guò)程中樣品的丟失。
5. 本試劑盒提供的逆轉(zhuǎn)錄試劑足夠10次20uL體系的常規(guī)法eTS逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)或20次5 uL體系的超敏法eTS逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，本試劑盒提供的PCR試劑足夠360次50 uL體系的PCR反應(yīng)。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯時(shí)，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相，離心后可形成水相層和有機(jī)層，這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開(kāi)。水相層(無(wú)色)主要為RNA，有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴(kuò)增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測(cè)定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈?zhǔn)綌U(kuò)增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴(kuò)增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進(jìn)行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進(jìn)行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達(dá)到分離目的。在pH高達(dá)12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開(kāi)而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價(jià)閉合環(huán)狀的兩條互補(bǔ)鏈不會(huì)*分離，當(dāng)以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時(shí)，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來(lái)的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過(guò)離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來(lái)而被除去。
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