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上海聯(lián)邁生物工程有限公司
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更新時間：2018-06-19 15:37:34瀏覽次數(shù)：549次
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即用型EMSA試劑盒凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA-electrophoretic mobility shift assay），也稱gel shift，是一種研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列相互作用的技術(shù)，可用于定性和定量分析。這一技術(shù)初用于研究DNA結(jié)合蛋白，目前已用于研究RNA結(jié)合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通過EMSA可以研究目的蛋白和特定的DNA序列的結(jié)合情況，從而可
即用型EMSA試劑盒
名稱 | 規(guī)格 | 價格 | 手冊 |
即用型EMSA試劑盒 | 100次 | 詢價 |
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凝膠遷移或電泳遷移率實驗（EMSA-electrophoretic mobility shift assay），也稱gel shift，是一種研究DNA結(jié)合蛋白和其相關(guān)的DNA結(jié)合序列相互作用的技術(shù)，可用于定性和定量分析。這一技術(shù)初用于研究DNA結(jié)合蛋白，目前已用于研究RNA結(jié)合蛋白和特定的RNA序列的相互作用。通過EMSA可以研究目的蛋白和特定的DNA序列的結(jié)合情況，從而可以研究細胞內(nèi)一些轉(zhuǎn)錄因子的激活水平。本產(chǎn)品具有下列特點：
1. 一站式，使用方便，本試劑盒提供了進行EMSA實驗的探針標記、蛋白和DNA
結(jié)合以及EMSA上樣等的主要試劑，使EMSA實驗變得簡單方便。
2. 非特異性結(jié)合低，EMSA結(jié)合緩沖液中含有poly(dI-dC)等有效成分，其中
poly(dI-dC)的濃度經(jīng)過優(yōu)化，可以很好的消除蛋白和標記探針間的非特異性結(jié)
合，同時又不會減弱目的轉(zhuǎn)錄因子和標記探針間的結(jié)合。
3. 本試劑盒足夠標記10-20次探針，足夠進行100個蛋白和探針的結(jié)合反應(yīng)。
RNA提取法：試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚，其中異硫氰酸胍可裂解細胞，促使核蛋白體的解離，使RNA與蛋白質(zhì)分離，并將RNA釋放到溶液中。當加入氯時，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進入水相，離心后可形成水相層和有機層，這樣RNA與仍留在有機相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA，有機層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
實驗步驟：
1、RNA的提取;
2、反轉(zhuǎn)錄合成cDNA;
3、PCR擴增;
4、產(chǎn)物的電泳和結(jié)果的測定。
RT-PCR是將RNA的反轉(zhuǎn)錄(RT)和cDNA的聚合酶鏈式擴增(PCR)相結(jié)合的技術(shù)。首先經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶的作用從RNA合成 cDNA，再以cDNA為模板，擴增合成目的片段。RT-PCR可以一步法或兩步法的形式進行。在兩步法RT-PCR中，每一步都在zui條件下進行。
堿變性提取質(zhì)粒DNA是基于染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性與復(fù)性的差異而達到分離目的。在pH高達12.6的堿性條件下，染色體DNA的氫鍵斷裂，雙螺旋結(jié)構(gòu)解開而變性。質(zhì)粒DNA的大部分氫鍵也斷裂，但超螺旋共價閉合環(huán)狀的兩條互補鏈不會*分離，當以pH4.8的NaAc高鹽緩沖液去調(diào)節(jié)其pH至中性時，變性的質(zhì)粒DNA又恢復(fù)原來的構(gòu)型，保存在溶液中，而染色體DNA不能復(fù)性而形成纏連的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復(fù)合物等一起沉淀下來而被除去。
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