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閱讀：144發(fā)布時(shí)間：2022-12-8
一、實(shí)驗(yàn)原理
細(xì)胞劃痕（wound healing）法是簡(jiǎn)捷測(cè)定細(xì)胞遷移遠(yuǎn)動(dòng)和修復(fù)能力的方法，類似體外傷口愈合模型，在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細(xì)胞上，用微量槍頭或其它硬物在細(xì)胞生長(zhǎng)的中間區(qū)域劃線，去除部分的細(xì)胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞至實(shí)驗(yàn)設(shè)定的時(shí)間，取出細(xì)胞培養(yǎng)板，觀察周邊細(xì)胞的生長(zhǎng)遷移能力，實(shí)驗(yàn)通常需設(shè)定正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別，通過不同分組之間的細(xì)胞對(duì)于劃痕區(qū)修復(fù)能力的不同可以判斷各組細(xì)胞的遷移與修復(fù)能力。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.所有要滅菌，直尺和marker筆在操作前紫外照射30min。
2.1）先用marker筆在6孔板背后，用直尺比著，大約每隔0.5-1cm一道，橫穿過孔，每孔至少穿過5條線。
2）在空中加入約 5×105個(gè)細(xì)胞（具體數(shù)量因細(xì)胞不同而不同，掌握為過夜能鋪滿），37°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)。
3）第二天用10µl槍頭比著直尺，與標(biāo)記線垂直的方向劃兩條平行線，槍頭要垂直，不能傾斜。
4）用PBS洗細(xì)胞3次，去除劃下的細(xì)胞，加入無血清培養(yǎng)基。
三、注意事項(xiàng)
1.在用PBS緩沖液沖洗時(shí)，注意貼壁慢慢加入，以免沖散單層貼璧細(xì)胞，影響
實(shí)驗(yàn)拍照結(jié)果。
2.一般做劃痕實(shí)驗(yàn)，都是無血清或者低血清(<2%），否則細(xì)胞增殖就不能忽略。
（也可用絲裂酶處理一小時(shí)）
3.按照6孔板背后畫線的垂直方向劃痕，可以形成者干交叉點(diǎn)，作為固定的檢
測(cè)點(diǎn)，以解決前后觀察時(shí)位置不固定的問題。
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