原理
微生物法測(cè)定食品中的*或*胺需要三種培養(yǎng)基，*測(cè)定用培養(yǎng)基、接種培養(yǎng)基（相當(dāng)于國(guó)標(biāo)中的乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基）以及菌種維持培養(yǎng)基（相當(dāng)于國(guó)標(biāo)中的乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基）。
*測(cè)定用培養(yǎng)基是根據(jù)Snell和Wright（1）描述的配方，并經(jīng)Krehl, Strong、Elvehjam（2）和Barton Wright(3)進(jìn)行了改良。該培養(yǎng)基經(jīng)美國(guó)分析化學(xué)家協(xié)會(huì)（AOAC）（4）和美國(guó)藥典（5）所*。
*測(cè)定用培養(yǎng)基采用植物乳桿菌（ATCC 8014）為測(cè)定用菌，標(biāo)準(zhǔn)曲線采用美國(guó)藥典*的濃度梯度（5），即0.0、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.2 、0.25μg/10ml/管。*測(cè)定用培養(yǎng)基可用于濁度和酸度分析。濁度分析時(shí)在35-37°C 培養(yǎng)16-18小時(shí)后進(jìn)行。酸度分析是在35-37°C培養(yǎng)72小時(shí)后進(jìn)行。
*測(cè)定用培養(yǎng)基不含*，但包含所有植物乳桿菌（ATCC 8014）培養(yǎng)所需的必要營(yíng)養(yǎng)和維生素。添加特定濃度的*會(huì)對(duì)應(yīng)測(cè)定菌相應(yīng)的生長(zhǎng)，能用濁度法和酸度滴定法測(cè)量。
植物乳桿菌的貯存液是在“乳桿菌瓊脂，AOAC”（貨號(hào)M366）中制備。方法是接種后35-37°C孵育24-48小時(shí)。貯存菌液可接種乳桿菌肉湯（貨號(hào)M367）以制備接種菌液。在35-37°C 孵育18-24小時(shí)后，離心，并用0.85% 生理鹽水清洗兩次，并調(diào)整其濃度。將測(cè)定菌液加入到含有*測(cè)定用培養(yǎng)基和*系列濃度的試管中。通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，并通過(guò)吸光度確定未知樣品的*水平。關(guān)于具體步驟，請(qǐng)參考國(guó)標(biāo)或國(guó)外標(biāo)準(zhǔn)方法(4, 5)。
應(yīng)非常小心避免培養(yǎng)基和玻璃器具的污染。應(yīng)使用潔凈的無(wú)去污劑的玻璃器具。少量的外源物質(zhì)的污染可能導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。
應(yīng)用
*測(cè)定用培養(yǎng)基*用于以植物乳桿菌（ATCC 8014）為測(cè)定用菌的微生物法檢測(cè)*或*。
培養(yǎng)基組分
成分 克/升
無(wú)維生素酶水解酪蛋白 12.000
葡萄糖 40.000
醋酸鈉 20.000
L-* 0.400
DL-* 0.200
硫酸腺嘌呤 0.020
鹽酸* 0.020
* 0.020
鹽酸硫胺素 0.0002
* 0.0002
鹽酸吡哆醇 0.0004
核黃素（*2） 0.0004
對(duì)氨基苯甲酸（PABA） 0.0002
* 0.0000008
* 1.000
磷酸二氫鉀 1.000
* 0.400
氯化鈉 0.020
* 0.020
硫酸錳 0.020
終pH值 (25°C) 6.8±0.2
質(zhì)量控制
Ø外觀——米黃色至黃色均一自由流動(dòng)粉末
Ø制備好的培養(yǎng)基顏色和澄清度——淡琥珀色透明溶液，可能有輕微沉淀
Ø配比濃度——在25°C下7.51%w/v(7.51g/100ml水）水溶液，pH值為6.8±0.2
ØpH值——6.60-7.00
配置
稱取7.51g干粉培養(yǎng)基溶于100ml蒸餾水。必要時(shí)加熱使培養(yǎng)基*溶解?；靹颍馆p微的沉淀均勻分布。檢測(cè)時(shí)，每管加入5ml培養(yǎng)基（包含濃度梯度標(biāo)準(zhǔn)品和未知樣品）。補(bǔ)足蒸餾水，使總體積達(dá)到10ml。高壓消毒15磅121°C 10分鐘。立即冷卻，通常每管(10 ml)*或*胺水平為0.0、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.2 、0.25μg時(shí)，可獲得滿意結(jié)果。
培養(yǎng)反應(yīng)
采用植物乳桿菌（ATCC 8014）微生物法測(cè)定*，35-37°C孵育16-18小時(shí)。
隨著標(biāo)準(zhǔn)品*濃度遞增（0.0、0.025、0.05、0.075、0.1、0.125、0.15、0.2、0.25μg/管)，測(cè)定菌生長(zhǎng)隨之增加，620nm吸光度逐漸升高。
文獻(xiàn)
1
Snell and Wright, 1941, J. Biol. Chem. 13:675.
2
Krehl, Strong and Elvehjem, 1943, Ind. & Eng. Chem., Ann. Ed. 15:471.
3
Barton-Wright, 1944, J. Biochem., 38:314.
4
Williams, (Ed.), 2005, Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists, 19th Ed., AOAC,Washington, D.C.
5
The United States Pharmacopoeia, 2006, USP29/NF24, The United States Pharmacopoeial Convention, Rockville, MD.
貨號(hào) | 品名 | 規(guī)格 | 儲(chǔ)存條件 | 保質(zhì)期 |
M040 | Niacin Assay Medium | 100G | 8°C下密閉保存 | 30個(gè)月 |
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