今天我公司技能專員特意為我們準(zhǔn)備十幾條ELISA操作的要點細節(jié)，閱讀之后可以總結(jié)一下您在實驗中有哪些要點被忽略掉了。酷愛ELISA實驗的新手們需留心這些細節(jié)：
1.不管是試劑盒，仍是其它產(chǎn)品，在運用之前我們都要仔細閱讀說明書。
2.相同的，必定要斷定試劑盒是不是在有效期內(nèi)。
3.按說明書斷定全部試劑*(數(shù)量、體積)。
4.標(biāo)本制備要標(biāo)準(zhǔn)，每份標(biāo)本體積要按2-3個復(fù)孔以上的量制備(儲存)，盡量分裝做備份。短期內(nèi)無法實驗者，留心低溫保存。
5.ELISA實驗中為了斷定*佳信號和布景應(yīng)將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預(yù)實驗中進行互相相抗的滴定。一起，應(yīng)包括在適當(dāng)規(guī)劃內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋。按試劑說明書慣例提供的規(guī)劃進行操作。
6.標(biāo)準(zhǔn)品的制作：關(guān)于每種細胞因子應(yīng)仔細閱讀說明書，留心每批的細節(jié)。在運用細胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其間的細胞因子。根據(jù)每批說明書中的細節(jié)，將凍干的細胞因子復(fù)溶。
7.一般待測抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性規(guī)劃的可通過將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的elisa操作流程、擴大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物體系可在必定規(guī)劃內(nèi)進步靈敏度。
8.根據(jù)檢測標(biāo)本數(shù)量斷定所需試劑的量。
9.按說明書將所用試劑平衡至室溫，制作所需試劑，DIY夾心法ELISA常見技能攻略。
10.挑選抗體時挑選一個單抗和一個多抗進行配對；若挑選兩個單抗，必須辨認(rèn)不同表位的抗體；從同一家公司挑選抗體對。
11.為了優(yōu)化靈敏度，建議過夜孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。
12.若運用過氧化物酶作為顯色體系，應(yīng)制止在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。
13.當(dāng)測定混合液體中的抗原時，如血清，建議在標(biāo)本稀釋液中加不相干的Ig。
14.準(zhǔn)備好全部實驗額定所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等。
