我們知道，可以用作ELISA測(cè)定的標(biāo)本很廣泛，包含了體液、分泌物和排泄物等，均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種抗體或抗原成份。這些標(biāo)本收集的時(shí)刻、方法和保存都有必定的要求。今日上海通蔚生物為您解說(shuō)：ELISA操作嚴(yán)格要求定當(dāng)做出好實(shí)驗(yàn)。
按試劑盒闡明書(shū)的要求預(yù)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑。ELISA頂用的蒸餾水或去離子水，包含用于洗刷的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液運(yùn)用pH計(jì)丈量較正。從冰箱中取出的實(shí)驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后運(yùn)用。試劑盒中本次實(shí)驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。
試劑盒的制作：關(guān)于每種細(xì)胞因子應(yīng)仔細(xì)閱讀闡明書(shū)，留意每批的細(xì)節(jié)。在運(yùn)用細(xì)胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細(xì)胞因子。根據(jù)每批闡明書(shū)中的細(xì)節(jié)，將凍干的細(xì)胞因子復(fù)溶。一般待測(cè)抗原標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性規(guī)模的可通過(guò)將標(biāo)準(zhǔn)品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml到15pg/ml。可利用標(biāo)準(zhǔn)的ELISA操作流程、擴(kuò)大試劑盒、第三類(lèi)試劑、或改動(dòng)酶底物系統(tǒng)可在必定規(guī)模內(nèi)進(jìn)步靈敏度。為了優(yōu)化靈敏度，建議孵育標(biāo)準(zhǔn)品和標(biāo)本。若運(yùn)用過(guò)氧化物酶作為顯色系統(tǒng)，應(yīng)嚴(yán)禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過(guò)氧化物ELISA試劑盒酶的活性。
試劑盒的操作因固相載體的構(gòu)成不同而有所差異，國(guó)內(nèi)醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)一般均用板式點(diǎn)。
洗板方法：
① 手工洗板，吸去(不行觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾回；將推薦的洗刷緩沖液至少0.3ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘，根據(jù)需要，重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。
② 主動(dòng)洗板，如果有主動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在嫻熟運(yùn)用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中。
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