ELISA技能法的操作要點(diǎn)
血清標(biāo)本可按常規(guī)辦法采集，應(yīng)留心防止溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會開釋出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP 為標(biāo)記的ELISA 測定中，溶血標(biāo)本或許會添加非特異性顯色。ELISA的操作因固相載體的形成不同而有所差異，海內(nèi)醫(yī)學(xué)檢修一般均用板式點(diǎn)。
的試劑，良好的儀器和準(zhǔn)確的操作是保證ELISA試劑盒檢測結(jié)果正確可靠的必要條件。血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同即是血清。如有細(xì)菌污染，菌體中或許含有內(nèi)源性HRP ，也會發(fā)生假陽性反應(yīng)。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測定（如血清、尿液），有些則需經(jīng)預(yù)處理（如糞便和某些分泌物）。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清天然凝結(jié)、血縮短后即可取得。大部分ELISA檢測均以血清為標(biāo)本。在ELISA中血漿和血清可相等使用。凍住血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，防止氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾，弄清后再檢測。
標(biāo)本的采納和保存
可用作ELISA測定的標(biāo)本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標(biāo)本以測定其中某種抗體或抗原成份。反復(fù)凍融會使抗體效價(jià)跌落，所以測抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測，宜少量分裝冰存。一般說來，在5天內(nèi)測定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超越一周測定的需低溫冰存。如在冰箱中保存過久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA 中可使本底加深。保存血清自采集時(shí)就應(yīng)留心無菌操作，也可加入適當(dāng)防腐劑。除特殊情況外，在醫(yī)學(xué)檢修中均以血清作為檢測標(biāo)本。本文將敘述板式ELISA各個(gè)操作過程的留心要點(diǎn)，珠式、管式及磁性球ELISA，進(jìn)口ELISA試劑盒均與特殊儀器配合使用，兩者均有具體的使用說明，嚴(yán)厲遵循劃定操作，必能得出正確的結(jié)果。
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