1. ELISA的原理
ELISA的根底是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍堅(jiān)持其免疫學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗體既保存其免疫學(xué)活性，又保存酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本（測(cè)定其中的抗體或抗原）與固相載體表面的抗原或抗體起反響。用洗滌的辦法使固相載體上構(gòu)成的抗原抗體復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標(biāo)記的抗原或抗體，也經(jīng)過反響而結(jié)合在固相載體上。
此刻固相上的酶量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反響的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)品，產(chǎn)品的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可依據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。因?yàn)槊傅拇呋屎芨撸g接地放大了免疫反響的結(jié)果，使測(cè)定辦法到達(dá)很高的敏感度。
2. ELISA的類型
ELISA可用于測(cè)定抗原，也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定辦法中有三個(gè)必要的試劑：（1）固相的抗菌素原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；（2）酶標(biāo)記的抗原或抗體，稱為"結(jié)合物"（conjugate）；（3）酶反響的底物。依據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的情況以及檢測(cè)的具體條件，可規(guī)劃出各種不同類型的檢測(cè)辦法。用于臨床檢驗(yàn)的ELISA主要有以下幾種類型：
2.1 雙抗體夾心法測(cè)抗原
一種借助酶免疫或放射免疫法檢測(cè)抗原的技能。即以已知抗體包被固相載體，相繼加入待測(cè)抗原和酶(或核素)標(biāo)記的抗體，從而構(gòu)成三明治樣雙抗體夾心。
雙抗體夾心法是檢測(cè)抗原（臨床檢測(cè)蛋白質(zhì)等大分子抗原）zui常用的辦法，操作步驟如下：
1）將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，構(gòu)成固相抗體。洗滌除掉未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
2）加受檢標(biāo)本，保溫反響。標(biāo)本中的抗原與固相抗體結(jié)合，構(gòu)成固相抗原抗體復(fù)合物。洗滌除掉其他未結(jié)合物質(zhì)。
3）加酶標(biāo)抗體，保溫反響。固相免疫復(fù)合物上的抗原與酶標(biāo)抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。此刻固相載體上帶有的酶量與標(biāo)本中受檢抗原的量相關(guān)。
4）加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)品。經(jīng)過比色，測(cè)知標(biāo)本中抗原的量。
2.2雙抗原夾心法測(cè)抗體
反響形式與雙抗體夾心法相似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測(cè)相應(yīng)的抗體。與間接法測(cè)抗體的不同之處為以酶標(biāo)抗原替代酶標(biāo)抗抗體。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋，可直接用于測(cè)定，因此其敏感度相對(duì)高于間接法。乙肝標(biāo)志物中抗HBs的檢測(cè)常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備，應(yīng)依據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同，尋找適宜的標(biāo)記辦法。
會(huì)員1.png)