影響細(xì)胞轉(zhuǎn)染的因素,你知道嗎?
血清：血清影響復(fù)合物的形成，降低轉(zhuǎn)染效率
陽離子脂質(zhì)體和 DNA 的量在使用血清時(shí)會(huì)有所不同，因此想在轉(zhuǎn)染培養(yǎng)基中加入血清時(shí)要進(jìn)行條件優(yōu)化。大部分細(xì)胞可以在無血清培養(yǎng)基中幾個(gè)小時(shí)內(nèi)保持健康，對(duì)于對(duì)血清缺乏比較敏感的細(xì)胞，可以使用 OPTI-MEM I 培養(yǎng)基。對(duì)于對(duì)血清缺乏比較敏感的貼壁細(xì)胞，建議使用 LIPOFECTAMINE 2000。
抗生素：
比如*和*，是影響轉(zhuǎn)染的培養(yǎng)基添加物。這些抗生素一般對(duì)于真核細(xì)胞無毒，但陽離子脂質(zhì)體試劑增加了細(xì)胞的通透性，使抗生素可以進(jìn)入細(xì)胞。這降低了細(xì)胞的活性，導(dǎo)致轉(zhuǎn)染效率低。
細(xì)胞代數(shù)：
轉(zhuǎn)染前細(xì)胞經(jīng)過 1-2 次傳代保證細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛容易轉(zhuǎn)染，注意貼壁細(xì)胞一旦長(zhǎng)滿就不好轉(zhuǎn)染。
細(xì)胞鋪板密度：
一般轉(zhuǎn)染時(shí)，貼壁細(xì)胞密度為 70%-90%，懸浮細(xì)胞密度為 2*10^6--4*10^6 細(xì)胞/ml 時(shí)效果較好。確保轉(zhuǎn)染時(shí)細(xì)胞沒有長(zhǎng)滿或處于靜止期。鋪板細(xì)胞數(shù)目的增加可以增加轉(zhuǎn)染活性和細(xì)胞產(chǎn)量。
DNA質(zhì)量：
DNA 質(zhì)量對(duì)轉(zhuǎn)染效率影響非常大。一般的轉(zhuǎn)染技術(shù)基于電荷吸引原理，如果 DNA 不純，如帶少量的鹽離子，蛋白，代謝物污染都會(huì)顯著影響轉(zhuǎn)染復(fù)合物的有效形成和轉(zhuǎn)染的進(jìn)行。
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