1 原理及適用范圍
阪崎腸桿菌(Enterobacter sakazakii )存在于腸道中，在一定條件下可引起人和動(dòng)物致病。能引起新生兒腦膜炎、致死性小腸結(jié)腸炎和菌血癥等疾病，且伴隨有嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥、發(fā)育障礙等癥狀，引起的死亡率高達(dá)50％以上。臨床調(diào)查證明，新生兒阪崎腸桿菌感染與嬰兒配方奶粉密切相關(guān)，奶粉中微量的阪崎腸桿菌污染也能導(dǎo)致感染的發(fā)生。
阪崎腸桿菌快速檢驗(yàn)套裝由阪崎腸桿菌快速增菌劑和阪崎腸桿菌測(cè)試片兩個(gè)產(chǎn)品組成。阪崎腸桿菌快速增菌劑是根據(jù)污染阪崎腸桿菌樣品——乳品及乳制品而專門設(shè)計(jì)的快速增菌劑，6 h～8 h即可完成樣品中阪崎腸桿菌的快速定向增殖，有效的縮短了檢測(cè)時(shí)間，提高了阪崎腸桿菌的檢測(cè)準(zhǔn)確度。
阪崎腸桿菌測(cè)試片（FilmplateTM Enterobacter sakazakii BQ208）是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，由阪崎腸桿菌選擇性培養(yǎng)基、吸水凝膠和特異性酶顯色劑等組成，簡(jiǎn)化了檢測(cè)程序，更加適合各級(jí)檢驗(yàn)部門和食品生產(chǎn)企業(yè)使用。本產(chǎn)品適用于奶粉、牛奶及奶制品的快速檢測(cè)。
參照標(biāo)準(zhǔn)：食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 阪崎腸桿菌檢驗(yàn)（GB 4789.40-2010）。

2 操作方法
2.1 樣品處理：
2.1.1 固態(tài)奶粉樣品處理：取一包增菌劑粉，倒入1000mL的三角瓶中，加入900mL純凈水，攪拌均勻，蓋塞后加熱煮沸，保持20min（有條件可采用115℃滅菌15min）。使用前預(yù)熱至44℃左右，加入100g奶粉樣品，溶解后，44℃±0.5℃培養(yǎng)6h即可。
2.1.2 液態(tài)奶樣品處理：取一包增菌劑粉，溶于900mL純凈水中，攪拌均勻，每100mL分裝于250mL三角瓶中，蓋塞后，加熱煮沸，保持20min（有條件可采用115℃滅菌15min）。使用前預(yù)熱至44℃左右，加入100mL液態(tài)奶樣品，混合均勻后，44℃±0.5℃培養(yǎng)6h即可。
2.2 接種：取出經(jīng)過增菌的樣品液，混勻后吸取1mL加入到4mL無菌水中，制成五倍稀釋液。將阪崎腸桿菌測(cè)試片（BQ208）置于平坦實(shí)驗(yàn)臺(tái)面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取五倍稀釋液1mL慢慢均勻地滴加到測(cè)試片濾紙片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置10s使培養(yǎng)基凝固，每個(gè)樣品接種兩片。做一片空白陰性對(duì)照。
2.3 培養(yǎng)：將測(cè)試片疊在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15h～24h。

3 結(jié)果判讀
對(duì)測(cè)試片進(jìn)行觀察，呈藍(lán)綠色的菌落為阪崎腸桿菌，為陽性結(jié)果；無任何點(diǎn)為陰性結(jié)果。出現(xiàn)陽性菌落的樣本，用其他更為可靠的方法進(jìn)行驗(yàn)證，沒有條件的至少要再取樣重復(fù)檢驗(yàn)一次。

4 結(jié)果報(bào)告
在100mL（或100g ）樣品中檢出或未檢出阪崎腸桿菌。

5 附加說明
5.1 使用阪崎腸桿菌快速增菌劑結(jié)合阪崎腸桿菌測(cè)試片的方法來檢驗(yàn)阪崎腸桿菌，僅需要21h～30h即可完成，這種方法快捷、方便，檢驗(yàn)準(zhǔn)確性與國標(biāo)方法（GB 4789.40-2010）相比，無顯著性差異。
5.2 快速增菌劑僅適于乳品及乳制品的增菌作用，配成增菌液加入樣品前請(qǐng)務(wù)必預(yù)熱至44℃左右使用。
5.3 操作方法2.2中將樣品增菌液推薦稀釋5倍后進(jìn)行檢測(cè)，具體可根據(jù)樣品污染程度酌情考慮。
5.4 如采用煮沸滅菌法，請(qǐng)當(dāng)天使用，采用高壓滅菌方法請(qǐng)?jiān)谝恢軆?nèi)使用。
5.5 注意使用過的增菌液中和測(cè)試片上可能帶有活菌，需及時(shí)按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。

關(guān)鍵詞：實(shí)驗(yàn)臺(tái) 恒溫培養(yǎng)箱

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