| 上海宇淳生物科技有限公司
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| 參考價 | ￥940-￥1500 |
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型號
-
品牌
其他品牌 -
廠商性質(zhì)
經(jīng)銷商 -
所在地
上海市
| 48T | 940元 | 1 盒 可售 |
| 96T | 1500元 | 1 盒 可售 |
更新時間：2024-05-31 10:47:26瀏覽次數(shù)：246
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土壤焦磷酸酶(S-PPase)試劑盒,微板法
土壤焦磷酸酶(S-PPase)試劑盒,微板法
本試劑盒僅供科研使用 1 土壤焦磷酸酶活性測定試劑盒說明書 (貨號：WS9330W 微板法 96 樣) 一、產(chǎn)品簡介： 土壤焦磷酸酶（焦磷酸鹽磷酸水解酶，EC 3.6.1.1）催化焦磷酸鹽水解成正磷酸鹽。在 土壤有機(jī)磷的礦化和轉(zhuǎn)化中發(fā)揮重要作用。 本試劑盒提供一種簡單、靈敏、快速的的檢測方法。土壤焦磷酸酶催化焦磷酸鹽水解 成磷酸鹽?？赏ㄟ^在 700nm 處測定生成的無機(jī)磷量來確定該酶活性大小。 二、試劑盒組分與配制： 【注】：全程操作需無磷環(huán)境；試劑配置用新的槍頭和玻璃移液器等，也可以用一次性塑料器皿， 避免磷污染。 三、所需的儀器和用品： 酶標(biāo)儀、96 孔板、臺式離心機(jī)、恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、蒸餾水。 四、土壤焦磷酸酶活性測定： 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個樣本做預(yù)測定，了解本批樣品情況，熟悉實(shí)驗(yàn)流程，避免實(shí) 驗(yàn)樣本和試劑浪費(fèi)！ 1、樣本制備： 取新鮮土樣或者 37 度烘箱風(fēng)干（需先粗研磨），過 40 目篩網(wǎng)備用。 2、上機(jī)檢測： ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 700 nm。 ② 反應(yīng) mix 制備：試劑四和五按照要求加蒸餾水溶解后，按試劑三：四：五=10:2:5 的比例依次混合配置（需現(xiàn)配現(xiàn)用，若出現(xiàn)藍(lán)色則需棄掉重新配置）。 ③ 在離心管中依次加入下列試劑： 試劑名稱（μL） 測定管 對照管 土壤樣本（g） 0.1 0.1 試劑一 370 370 試劑二 30 混勻，37℃振蕩培養(yǎng) 2h（間隔 30min 振蕩混勻一次） 試劑三 200 200 試劑二 30 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 試劑一 液體 80mL×1 瓶 4℃保存 試劑二 粉體 mg×1 瓶 4℃保存 用前甩幾下使試劑落入底部，再 加 6.4mL 蒸餾水，混勻溶解備用。 試劑三 液體 65mL×1 瓶 4℃保存 試劑四 粉體 mg×1 支 4℃保存 臨用甩幾下使試劑落入底部，再 加 4.2mL 蒸餾水，混勻溶解備用。 試劑五 粉體 mg×7 支 4℃保存 臨用甩幾下使試劑落入底部，每 支再加 1.5mL 蒸餾水，混勻溶解 備用，現(xiàn)配現(xiàn)用。 標(biāo)準(zhǔn)品 粉體 1 mL×1 支 4℃保存 若重新做標(biāo)曲，則用到該試劑本試劑盒僅供科研使用 2 立即混勻，于 12000rpm，室溫或 4℃離心 5min，上 清液需立即測定，不可久置。 ④ 顯色反應(yīng)，在 96 孔板中依次加入： 上清液 50 50 反應(yīng) mix 150 150 混勻，室溫靜置 15min，于 700nm 處讀取吸光值 A， △A=A 測定-A 對照（參看注意事項(xiàng)）。 【注】：1. 若△A 的值在零附近，可延長孵育時間 T（如增至 5h）。 2. 若是同時檢測同一背景下的土壤樣本（如同一批樣本不同時間點(diǎn)的取樣）， 此批土壤樣本可做一個批次的樣本自身對照，節(jié)省時間。 五、結(jié)果計(jì)算： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.5987x - 0.0003；x 是標(biāo)準(zhǔn)品摩爾濃度（μmol/mL）， y 是△A。 2、活性定義：在 37℃，每克土壤每小時水解 1μmol 焦磷酸產(chǎn)生 1μmol 無機(jī)磷定義為 1 個 酶活單位。 土壤焦磷酸酶(μmol/h/g 土樣)=(△A+0.0003)÷0.5987×V1÷W÷T =0.5×(△A+0.0003)÷W V1---孵育階段整個反應(yīng)體積：600μL=0.6mL； W---土壤樣品質(zhì)量，g； T---催化反應(yīng)時間，2 h； 附：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程： 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液（5μmoL/mL）：標(biāo)準(zhǔn)品用 10mL 蒸餾水溶解。（母液需在兩天內(nèi)用）。 2 把母液稀釋成六個濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品：0，0.2，0.4，0.6，0.8，1. μmol/mL。也可根 據(jù)實(shí)際樣本來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 依據(jù)顯色反應(yīng)階段測定管的加樣體系操作，根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
