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離子結(jié)合型果膠(ISP)含量試劑盒,微板法
離子結(jié)合型果膠(ISP)含量試劑盒,微板法
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更新時間:2024-06-19 14:51:29瀏覽次數(shù):353

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【簡單介紹】
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離子結(jié)合型果膠(ISP)含量試劑盒,微板法
果膠是構(gòu)成細(xì)胞初生壁和中膠層的主要成分,主要由原果膠、果膠酸甲酯和果膠酸等形
式廣泛分布于植物果實(shí)、根莖和葉中。

離子結(jié)合型果膠(ISP)含量試劑盒,微板法

本試劑盒僅供科研使用 1 離子結(jié)合型果膠(ISP)含量試劑盒說明書 (貨號:WS5070W 微板法 96 樣) 一、產(chǎn)品簡介: 果膠是構(gòu)成細(xì)胞初生壁和中膠層的主要成分,主要由原果膠、果膠酸甲酯和果膠酸等形 式廣泛分布于植物果實(shí)、根莖和葉中。果膠間以 Ca2+、Mg2+、氫鍵、糖苷鍵、酯鍵等方 式與其他物質(zhì)交聯(lián),通過特異的提取方式可以提取得到離子結(jié)合型果膠(ISP)和共價結(jié) 合果膠(CSP)。 本試劑盒用帶有螯合劑的酸溶液特異提取離子結(jié)合型果膠(ISP),采用硫酸-咔唑比 色法測定果膠含量。果膠水解為半乳糖醛酸,在硫酸溶液中與咔唑進(jìn)行縮合反應(yīng),生成紫 紅色物質(zhì),經(jīng)光譜掃描該物質(zhì)在 530nm 處有吸收峰,顏色深淺與果膠含量成正比,進(jìn) 而得離子結(jié)合型果膠含量。 二、測試盒組成和配制: 試劑名稱 規(guī)格 保存要求 備注 提取液 A 液體 120 mL×1 4℃保存 提取液 B 液體 120 mL×1 4℃保存 試劑一 液體 1.5mL×1 4℃保存 標(biāo)準(zhǔn)品 粉劑 mg×1 4℃保存 若重新做標(biāo)曲,則用到該試劑 三、所需的儀器和用品: 酶標(biāo)儀、96 孔板、水浴鍋、可調(diào)式移液器、乙醇、濃硫酸、研缽。 四、離子結(jié)合型果膠(ISP)含量測定: 建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn) 樣本和試劑浪費(fèi)! 1、樣本制備: ① 取 0.1g 組織(烘干且過篩后的粉末組織可取 0.02g),加 1.5mL 80%乙醇,研磨勻 漿,85℃水浴 10min,取出流水冷卻后,8000rpm25℃10min,棄上清,留沉淀(盡 量保留沉淀)。 ② 向沉淀中加入 1mL 80%乙醇震蕩混勻 2min85℃水浴 10min,取出流水冷卻后, 8000rpm,25℃10min,棄上清,留沉淀(盡量保留沉淀)。 ③ 加入 1mL 的提取液 A,90℃水浴 15min(間隔 3min 晃動一次),8000rpm,室溫(25℃離心 10min,棄上清,留沉淀,向沉淀中加入 1mL 丙酮振蕩混勻,8000rpm,室溫 25℃)離心 10min,棄上清,留沉淀,(注:若色素仍很多,繼續(xù)用丙酮提取 1-2 ), 打開 EP 管置于 90℃孵育 20min,使沉淀干燥。 ④ 向沉淀中加入 1mL 提取液 B,室溫(25℃)震蕩提取 1 小時后,8000rpm,25℃離 10min,上清液待測。 2、上機(jī)檢測: ① 酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長為 525nm。 ② 可取兩個樣本做適當(dāng)梯度的稀釋(如 4 倍,即 1 份上清液+3 份蒸餾水),確定 適合本次實(shí)驗(yàn)的稀釋倍數(shù) D。 ③ 在 EP 管中依次加入:本試劑盒僅供科研使用 2 試劑名稱 µL測定管 空白管 (僅做一次) 樣本 70 蒸餾水 70 濃硫酸 420 420 可用封口膜纏緊,85℃水浴 15min 后, 流水冷卻至室溫。 試劑一 14 14 混勻,室溫(25℃)暗處反應(yīng) 30min(間隔 10min 混勻一次),立即取出 200µL 96 孔中,于 530nm 處讀取吸光值 AA=A 測定-A 空白。 【注】:1、濃硫酸必須是分析純級別,且不能長期開口放置,否則影響顯色結(jié)果。另外濃硫酸具有 強(qiáng)腐蝕性,操作時需特別注意,85℃加熱取出后冷卻再打開蓋子,以防液體飛濺燒傷。 2、顯色反應(yīng)必須在暗處反應(yīng),否則顏色很快消失或者變淡,影響吸光值。 3、若 A 測定管值大于 1.8,可用蒸餾水稀釋樣本即待檢測上清液,則稀釋倍數(shù) D 需代入公 式計算;或若 A 值再零附近可增加樣本取樣質(zhì)量 W。 五、結(jié)果計算: 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:y = 1.8749x -0.0018,x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y A。 2、離子結(jié)合型果膠(mg /g 重量)= [(ΔA +0.0018) ÷1.8749×V1]÷ (W×V1÷V)×D =0.53×(ΔA +0.0018)÷W×D W---樣本重量,g; V---加入提取液體積,1mL; V1---加入樣本體積,0.07mL; D---稀釋倍數(shù)。 附:標(biāo)準(zhǔn)曲線制作過程: 1 制備標(biāo)準(zhǔn)品母液(0.5mg/mL):臨用前向標(biāo)準(zhǔn)品中加入 2mL 蒸餾水(現(xiàn)配現(xiàn)用)。 2 把母液用蒸餾水稀釋成六個濃度梯度的標(biāo)準(zhǔn)品:00.1,0.20.3,0.40.5. mg/mL。 也可根據(jù)實(shí)際樣本來調(diào)整標(biāo)準(zhǔn)品濃度。 3 依據(jù)測定管的加樣表操作,根據(jù)結(jié)果即可制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

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