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本試劑盒僅供研究使用。

使用目的：96T

本試劑盒用于測定人血清,血漿樣本中乙肝核心抗體(HBcAb)表達。 

實驗原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標本中人乙肝核心抗體(HBcAb)表達。用純化的抗原包被微孔板，制成固相抗原，可與樣品中乙肝核心抗體(HBcAb)相結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后再與HRP標記的抗原結(jié)合，形成抗原-抗體-酶標抗原復(fù)合物，經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中人乙肝核心抗體(HBcAb)的存在與否。

試劑盒組成

樣本處理及要求：

1.血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。

2.血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

3.不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟：

編號：將樣品對應(yīng)微孔按序編號，每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。待測樣品孔中加待測樣本50μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，

加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液加蒸餾水至600ml后備用

洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

顯色：每孔先加入顯色劑A 50μl，再加入顯色劑B 50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘

終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

計算和結(jié)果判定：

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.20

臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為乙肝核心抗體(HBcAb)陰性

陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為乙肝核心抗體(HBcAb)陽性。

注意事項

1.操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

4.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5.底物請避光保存。

6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm

7.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸，使用時必須注意安全。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：；2-8℃。

2．有效期：6個月