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上海雅吉生物科技有限公司
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細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
2019-7-23 閱讀(458)
一、原理
細(xì)胞在培養(yǎng)瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長，同時也將細(xì)胞數(shù)量擴大，就必須進行傳代（再培養(yǎng)）。
傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進行各種實驗的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。
二、材料和試劑
1、細(xì)胞：貼壁細(xì)胞株
2、試劑：0.25％胰酶、1640培養(yǎng)基（含10％小牛血清）
3、儀器和器材：倒置顯微鏡，培養(yǎng)箱、培養(yǎng)瓶、吸管、廢液缸等
三、操作步驟
1、將長滿細(xì)胞的培養(yǎng)瓶中原來的培養(yǎng)液棄去。
2、加入0.5―1ml 0.25％胰酶溶液，使瓶底細(xì)胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細(xì)胞。隨著時間的推移，原貼壁的細(xì)胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時將胰酶棄去，加入10ml培養(yǎng)液終止消化。觀察消化也可以用肉眼，當(dāng)見到瓶底發(fā)白并出現(xiàn)細(xì)針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1―3分鐘。
4、用吸管將貼壁的細(xì)胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實踐培養(yǎng)液塞好橡皮塞，置37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。
附：消化液配制方法：
稱取0.25克胰酶蛋白酶（活力為1：250），加入100ml無Ca2+ 、Mg2+的Hank’s液溶解，濾器過濾除菌，4℃保存，用前可在37℃下回溫。胰酶溶液中也可加入EDTA，使終濃度達(dá)0.02％。
