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上海雅吉生物科技有限公司
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腺苷脫氨酶（ADA）比色法測試盒
2020-12-28 閱讀(640)
腺苷脫氨酶（ADA）測試盒說明書
一、測定原理
腺苷脫氨酶（Adenosine deaminase，ADA）催化腺嘌呤核苷水解，產(chǎn)生次黃嘌呤核苷和氨，然后對產(chǎn)生的氨進(jìn)行顯色，從而可以計算血清 ADA 的活性。
腺苷脫氨酶（ADA）比色法測試盒
二、試劑組成及配制（100 管/48 樣）：
試劑一：粉劑×6 支，稀釋液 5ml×6 瓶，4℃保存，臨用前 2 小時每支粉劑用 1 瓶稀釋液溶解。
[注]:需充分混勻*溶解，否則會影響結(jié)果。配好后4C保存48小時。
試劑二：粉劑×2 支，稀釋液 100ml×2 瓶，臨用時每支粉劑用 1 瓶稀釋液溶解即成，4℃避光
腺苷脫氨酶（ADA）比色法測試盒
保存。
試劑三：貯備液 2ml×2 瓶，稀釋液 100ml×2 瓶。臨用時每瓶貯備液用 1 瓶稀釋液稀釋
即成，4℃避光保存，可穩(wěn)定兩個月。
試劑四：1mg 氨氮/ml 標(biāo)準(zhǔn)貯備液 1ml×1 瓶，4℃保存。
25µg 氨氮/ml 標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液的配制：取 1mg 氨氮/ml 標(biāo)準(zhǔn)貯備液 0.25ml 用雙蒸水定容至 10ml，充分混勻，現(xiàn)用現(xiàn)配。
腺苷脫氨酶（ADA）比色法測試盒
三、操作表：
| 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 測定管 | 對照管 |
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雙蒸水（ml） | 0.02 |
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25µg 氨氮/ml 標(biāo)準(zhǔn)液（ml） |
| 0.02 |
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樣本（ml） |
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| 0.02 | 0.02 |
試劑一（ml） | 0.25 | 0.25 | 0.25 |
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混勻，37℃準(zhǔn)確反應(yīng) 60 分鐘 |
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試劑二（ml） | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
試劑一（ml） |
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| 0.25 |
試劑三（ml） | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
混勻，37℃水浴 30 分鐘后，室溫靜置 10 分鐘，波長 640nm，1㎝光徑，雙蒸水調(diào)零，測各管吸光度值。
【注】本試劑盒可測定10%組織勻紫中的ADA. 但是顯色后需3500轉(zhuǎn)/分鐘，離心10分鐘后才能進(jìn)行比色
腺苷脫氨酶（ADA）比色法測試盒
四、單位定義與計算公式：
（一）、血清中 ADA 酶活性的計算：
1、單位定義：1ml 血清在 37℃和底物作用 60 分鐘產(chǎn)生 1µg 氨氮為一個酶活性單位。
2、計算公式：
腺苷脫氨酶（ADA）比色法測試盒
血清中ADA 測定OD值 - 對照OD值 標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液濃度 活性 (U / ml ) = 標(biāo)準(zhǔn)OD值 - 空白OD值 ´ 25m g氨氮 /ml
- 計算舉例
取某人血清按操作表進(jìn)行ADA的檢測，測得各管吸光度為：空白管0.08，標(biāo)準(zhǔn)管0. 070，測定管0. 173，對照管0.113 。則計算如下:
血清中ADA 測定OD值 - 對照OD值 標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液濃度 活性 (U / ml ) = 標(biāo)準(zhǔn)OD值 - 空白OD值 ´ 25m g氨氮 /ml
0.173 - 0.1131
= 0.070 - 0.008 ´25 =24.1 (U / ml )
（二）、組織勻漿中 ADA 酶活性的計算：
1、單位定義：每毫克組織蛋白在 37℃和底物作用 60 分鐘產(chǎn)生 1µg 氨氮為一個酶活性單位。
2、計算公式：
組織中ADA活性 |
| 測定OD值-對照OD值 | 標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液濃度 |
| 待測樣本的蛋白濃度 |
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( | U / mgprot* | ) | = |
| ´ (25m g氨氮 / ml ) | ¸ | (mgprot / ml ) |
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標(biāo)準(zhǔn)OD值-空白OD值 |
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3、計算舉例:
取10%雞肝組織勻漿按操作表進(jìn)行ADA的檢測，測得各管吸光度為:空白管值0.008,標(biāo)準(zhǔn)管OD值0.070,測定管OD值0.237,對照管OD值0.202，測得10%雞肝組織勻漿的蛋白含量*為14. 14mgprot/ml.則計算如下:
組織中ADA活性 |
| 測定OD值-對照OD值 | 標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液濃度 |
| 待測樣本的蛋白濃度 |
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| |||
( | U / mgprot | ) | = |
| ´ (25m g氨氮 / ml ) | ¸ | (mgprot / ml ) |
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標(biāo)準(zhǔn)OD值-空白OD值 |
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組織中ADA活性 |
| 0.237-0.202 |
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( | U / mgprot | ) | = |
| ´25÷14.14=0.9 |
| (U/mgprot ) |
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0.070-0.008 |
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五．測定意義
ADA廣泛分布于各組織中，以盲腸、小腸粘膜和脾中含量高，肝中含量僅為小腸的7%~14%，肝臟中90%在細(xì)胞質(zhì)中，細(xì)胞核含量低，但卻是胞核中有關(guān)核酸代謝酶中含量的一個。
在肝臟疾病中，ADA 活性增高。阻塞性黃疸時此酶活性一般不升高， 而在肝實質(zhì)性損傷時，此酶和ALT同時升高，故有助于鑒別。在慢性活動性肝炎和肝硬化時ALT陽性率較低，而ADA陽性率可達(dá)90%左右，增高較明顯。
腺苷脫氨酶（ADA）比色法測試盒
