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上海雅吉生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 培養(yǎng)原代細(xì)胞,細(xì)胞系價(jià)格,耐藥細(xì)胞株,實(shí)時(shí)熒光pcr試劑盒 |
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微球數(shù)量太少？這三點(diǎn)一定要注意
2021-1-8 閱讀(658)
提及多因子的定量檢測(cè)，越來越多的小伙伴會(huì)一個(gè)想到 Luminex 技術(shù)。Luminex 基于微球設(shè)計(jì)原理，可以在 1 張 96 孔板中定量檢測(cè)多達(dá) 100 種分析物，僅需少量樣本，節(jié)約時(shí)間、經(jīng)費(fèi)，可謂一舉多得。
R&D Systems® 擁有 Luminex Assay 以及 Luminex High Performance Assay 兩個(gè)產(chǎn)品系列，均基于帶有顏色編碼的微球，這些微球表面包被了識(shí)別不同目標(biāo)分析物的特異性抗體。當(dāng)預(yù)包被的微球與待檢樣本孵育時(shí)，分析物被微球捕獲，經(jīng)由生物素標(biāo)記的特異性檢測(cè)抗體混合物識(shí)別，加入鏈霉親和素 - PE 熒光素底物后發(fā)光并進(jìn)行定量檢測(cè)。
01 樣品粘稠，未有效稀釋
解決方法：測(cè)定前，如果是凍存的血清 / 血漿樣品，一步需將樣品充分解凍(如果樣本包含碎片的話也會(huì)影響數(shù)據(jù)的讀取)。建議在加樣前，將樣本進(jìn)行 16,000 x g 離心 4 分鐘，特殊情況下可能要離心更長(zhǎng)的時(shí)間，再用 Calibrator diluent 按照建議的稀釋比對(duì)樣本進(jìn)行稀釋。
02 進(jìn)樣針孔堵塞，進(jìn)樣針高度不正確
解決方法：以上兩種情況都會(huì)導(dǎo)致沒有充足的微球進(jìn)入，前者需用超聲的方法清洗針孔，如有需要進(jìn)行替換；后者需確定進(jìn)樣針的高度并調(diào)整至合適位置。
也可以進(jìn)入維護(hù)頁(yè)面，點(diǎn)擊 Cmds&Routines，使用 0.1 N NaOH 運(yùn)行深度清洗。
03 操作有誤，清洗步驟中孔板未附磁力架
解決方法：這是新手常常會(huì)出現(xiàn)的失誤。對(duì)于磁珠形式的微球，切記清洗時(shí)整個(gè)過程都要附有磁力架，確定磁力架正確地結(jié)合在微孔板上，洗板時(shí)磁力架應(yīng)置于微孔板底部，棄去洗滌液前應(yīng)靜置 1 分鐘。不要吸干，以防止磁珠丟失。
如果磁珠數(shù)量少，建議不要用自動(dòng)洗板機(jī)清洗，我們發(fā)現(xiàn)自動(dòng)洗板機(jī)清洗可能會(huì)造成磁珠聚集，從而影響其數(shù)量。
在實(shí)際的 Luminex 實(shí)驗(yàn)操作中，有客戶經(jīng)常碰到微球數(shù)少于 50 個(gè)甚至只有幾個(gè)的問題，極大地影響了實(shí)驗(yàn)結(jié)果，其可能的原因和解決方法有哪些呢？
