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產(chǎn)品簡介
本試劑盒采用*的包裝體系，包含了快速制備小鼠組織基因組DNA和后續(xù)PCR擴(kuò)增的
所有試劑，適用于從小鼠尾巴、耳朵以及腳趾等組織中一步法提取基因組DNA并用于后續(xù)的
PCR擴(kuò)增和檢測。整個提取過程不包含勻漿、破碎、過夜消化、酚氯仿抽提、DNA沉淀或柱
式純化等操作，實(shí)驗(yàn)操作簡便、快捷，而且結(jié)果穩(wěn)定可靠。
本試劑盒提供的2 x Dir PCR MasterMix是一種高擴(kuò)增兼容性的PCR試劑，無需*
去除蛋白等雜質(zhì)，便能進(jìn)行高效特異擴(kuò)增。該預(yù)混Mix包含抗體修飾的Taq DNA聚合酶、
dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR反應(yīng)增強(qiáng)劑和穩(wěn)定劑，操作時只需加入粗提模板和引物
即可進(jìn)行后續(xù)檢測，具有操作簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等特點(diǎn)，特別適合于高
通量的檢測篩選。Mix中預(yù)混有電泳染料，可在反應(yīng)結(jié)束后直接進(jìn)行電泳檢測，使用方便快
捷。PCR產(chǎn)物的3’端帶A，可進(jìn)行TA克隆。
產(chǎn)品特點(diǎn)
簡單快速：適用于從小鼠尾巴、耳朵以及腳趾等組織中一步法基因鑒定。
高特異性：本產(chǎn)品所用Taq酶為抗體修飾熱啟動酶，具有高效的模板和引物親和性及擴(kuò)增特
 異性，特別適合基因分型和轉(zhuǎn)基因鑒定。
基因檢測：本產(chǎn)品操作簡便，結(jié)果可靠，特別適合小鼠的高通量分析檢測。
注意事項(xiàng)：請務(wù)必在使用本試劑盒之前閱讀此注意事項(xiàng)。
1．樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致提取的DNA片段較小且提取量下降。
2．組織裂解緩沖液Tissue Lysis Buffer應(yīng)放置于室溫保存，如放在低溫（-20℃或4℃）保存
時有沉淀析出，可在37℃水浴中重新溶解沉淀，并搖勻溶液后使用 。
3．本產(chǎn)品提供的2 x Dir PCR MasterMix 為2x母液，使用時需加入模板和引物，并加入滅菌
水補(bǔ)足體積，使其濃度為1x即可進(jìn)行反應(yīng)

實(shí)驗(yàn)操作步驟
1．第一次使用本試劑盒時，請仔細(xì)查看組織裂解緩沖液Tissue Lysis Buffer中是否有結(jié)晶析
出，如有結(jié)晶請將該緩沖液于室溫充分平衡至結(jié)晶*溶解，或在37℃水浴中重新溶解
沉淀搖勻后使用。組織裂解緩沖液溶解后在室溫保存。
2．按照下表配方配制組織消化液：
 組成成分 體 積
Tissue Lysis Buffer 96 µl
 Digestive Enzyme 4 µl
 Total 100 µl
 注意：消化液請盡量現(xiàn)用現(xiàn)配，以保證Digestive Enzyme的活性。
3．取少量小鼠組織樣品（約5~10 mg）于1.5 ml的離心管中，加入100 µl 組織消化液，確保
組織樣品*浸潤于組織消化液中，65℃處理30 min。期間每隔10 min左右輕彈管底，
提高消化效率。
4．消化結(jié)束后，瞬時離心，并于95～100℃下處理5 min。
5． PCR擴(kuò)增反應(yīng)。取1 µl上清用于PCR反應(yīng)，參考PCR體系及擴(kuò)增程序如下：
參考反應(yīng)體系
PCR反應(yīng)體系的建立，25 µl體系如下：
 組成成分 體 積
2 x Dir PCR MasterMix 12.5 µl
 正向引物（10 µM） 0.5 µl
 反向引物（10 µM） 0.5 µl
 模板DNA 1.0 µl
RNase-Free ddH2O 補(bǔ)至25 µl