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上海雅吉生物科技有限公司
主營(yíng)產(chǎn)品： 培養(yǎng)原代細(xì)胞,細(xì)胞系價(jià)格,耐藥細(xì)胞株,實(shí)時(shí)熒光pcr試劑盒 |
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石蠟包埋組織中蛋白提取試劑盒
2021-10-21 閱讀(212)
描述：
福爾馬林固定石蠟包埋組織在生物醫(yī)學(xué)研究中被廣泛使用，但是從石蠟包埋組織中提取蛋白由于甲醛會(huì)介導(dǎo)
分子交聯(lián)而變得異常困難，傳統(tǒng)方法從石蠟包埋組織中提取蛋白需要使用有機(jī)溶劑重復(fù)脫蠟和水化，然后在
高溫下或不可避免的超聲處理后提取蛋白。這些方法雖然在某些情況下是比較有效的，但是操作繁瑣，需要
消耗 3-4 小時(shí)。Minute TM 石蠟包埋組織蛋白提取試劑盒提供了一種簡(jiǎn)便，快速的方法，不需有機(jī)溶劑脫蠟。
整個(gè)過(guò)程可以在不到 1 小時(shí)的時(shí)間內(nèi)完成，蛋白產(chǎn)量可以高達(dá) 2-3 毫克/毫升。
應(yīng)用：
提取的蛋白可用于 SDS-PAGE，WB，ELISA，免疫沉淀和蛋白質(zhì)組學(xué)研究。
試劑盒組分
1. 20ml 緩沖液 A
2. 20ml 緩沖液 B
3. 20 個(gè) 1.5ml 離心管
4. 2 根塑料研磨棒
儲(chǔ)存：
室溫儲(chǔ)存
所需附加材料
臺(tái)式離心機(jī)（最大轉(zhuǎn)速 14000-16000rpm）
加熱塊或者水浴
產(chǎn)品重要信息
本試劑盒可用于從石蠟包埋組織中提取總蛋白，最終提取蛋白產(chǎn)量和蛋白種類由固定時(shí)間
和樣品時(shí)間決定。長(zhǎng)時(shí)間固定（>48 小時(shí)）和固定老化的樣品，預(yù)計(jì)提取的蛋白濃度會(huì)較低。
蛋白酶抑制劑推薦在 Buffer B 轉(zhuǎn)移到新的 1.5ml 離心管后添加（見(jiàn)步驟 3）。蛋白濃度測(cè)定，推
薦使用表面活性劑兼容的 BCA 試劑盒，因?yàn)樘崛【彌_液（Buffer B）中含有 1%的 SDS。研究
蛋白磷酸化，磷酸酶抑制劑（如羅氏）應(yīng)在使用前加入 Buffer B 中。
操作方法：
1. 去除組織切片中多余的石蠟，組織切片厚度大約在 10-20um，大小應(yīng)在 30-60 平方毫米。取
4-5 個(gè)組織切片放入 1.5 或 2.0ml 離心管中（實(shí)驗(yàn)室自備），加入 1ml Buffer A。
2. 在 90-95℃加熱容塊或水浴中孵育 8-10 分鐘。翻轉(zhuǎn)管子 2-3 次后，迅速將熱的緩沖液*去
除，留下組織在管中。用吸頭將組織刮到一個(gè)新的 1.5ml 離心管中（試劑盒內(nèi)提供的，注意
不要試用其他離心管，可能與提供的研磨棒不匹配）。
3. 翻轉(zhuǎn) Buffer B 瓶子 20-30 次，使組織分離粉混勻，快速轉(zhuǎn)移 200ul Buffer B 到裝有組織的管
子中（可選：將吸頭剪掉 2-3mm 使開(kāi)口變大更容易轉(zhuǎn)移 Buffer B）。Buffer B 加入的量根據(jù)
組織切片的數(shù)量決定，一般每個(gè)組織切片使用 50ul Buffer B。
4. 使用試劑盒提供的研磨棒扭轉(zhuǎn)研磨組織樣品大約 2 分鐘（研磨棒是可重復(fù)使用的，用蒸餾水
清洗，用紙巾擦干即可）。蓋上蓋子，90-95℃加熱塊中或水浴加熱 40 分鐘-1 小時(shí)。加熱后
在 14000-16000rpm 離心 10 分鐘。將上清液轉(zhuǎn)移到一個(gè)新的離心管中即可用于下游應(yīng)用或存
儲(chǔ)于-80℃。
