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產(chǎn)品規(guī)格：1*10^6個(gè)細(xì)胞/T25
凍存條件:無血清細(xì)胞凍存液
氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。
溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%
傳代方法 1:2~1:4傳代
傳代情況： 2天換液
PK-1豬腎細(xì)胞系描述：收集瓶子中培養(yǎng)基留作過渡培養(yǎng)細(xì)胞鋪板是細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中常見又必須掌握的一門技術(shù)，看似簡(jiǎn)單，然而卻經(jīng)常遇到如細(xì)胞居中或者中間稀疏等不均勻分布的現(xiàn)象，結(jié)果就是只能整板扔掉，重新鋪板，既耽擱時(shí)間又浪費(fèi)了細(xì)胞及培養(yǎng)板等資源。歷經(jīng)多次失敗后，你才會(huì)發(fā)現(xiàn)，原來細(xì)胞鋪板是有規(guī)律可循的，今天我們就聊一聊：細(xì)胞鋪板的3種手法。

首先，我們來看看細(xì)胞鋪板不均勻的3種常見情況：

1，中間多，周圍少

2，中間少，四周多

3，呈現(xiàn)一坨一坨的狀態(tài)

這么多種不均勻的情況，到底該怎么拯救呢？一起來看看細(xì)胞鋪板的三種手法：
手法一：均勻單層

要鋪成那種很均勻的單層細(xì)胞，手法如下：

1，細(xì)胞板子先加入一定量(一般是總量培養(yǎng)基的1/5)的培養(yǎng)基，放入孵箱中放置10-20min。

2，在滴入細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞板子與通風(fēng)櫥有一定的角度，沿著板壁的孔邊緣滴入。

3，滴入后，呈“8”字方法搖晃5-8次。

4，置于水平臺(tái)上，放置10-20分鐘

5，放入孵箱。
在細(xì)胞鋪板時(shí)，每一種板子的孔面積有多大，培養(yǎng)的液體量以及加入細(xì)胞量如下：

手法二：中間少，周圍多
其實(shí)細(xì)胞鋪板不一定都需要單個(gè)單個(gè)的那么均勻，比如，做免疫熒光時(shí)，學(xué)霸姐姐喜歡鋪中間少，周圍稍多的板子，

因?yàn)檫@個(gè)樣子可以同時(shí)檢測(cè)到單個(gè)細(xì)胞的形態(tài)，另外又可以照一點(diǎn)低倍的用作于統(tǒng)計(jì)，所有的細(xì)胞都在一個(gè)環(huán)境中。

特別說明一下：這里的多也只是相對(duì)于多，細(xì)胞也是單層的。

中間

周圍

要鋪這樣的細(xì)胞樣子，那鋪細(xì)胞時(shí)要注意手法了：
1，細(xì)胞板子不需要提前用培養(yǎng)基潤(rùn)洗，直接從邊上滴入混有細(xì)胞的培養(yǎng)基。

2，放置30s-1min后，前后搖晃5-8次。

3，放在水平臺(tái)上靜置2-5min。

4，放入孵箱。

手法三：中間多，周圍少

學(xué)一般在提取蛋白或者提取RNA的時(shí)候，可以這樣鋪板，因?yàn)橛行┘?xì)胞刮刀不好用，沒有辦法刮到周圍的。想要鋪中間多，周圍少的板子，手法如下：

1，細(xì)胞板子不需要提前潤(rùn)洗，從中間滴入進(jìn)去后。

2，把板子朝一個(gè)方向順時(shí)針或者逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)3-5圈。

3，水平臺(tái)上靜置2-5min。

4，放入孵箱。

總結(jié)一下：想要細(xì)胞鋪板鋪得好，背景知識(shí)很重要
其實(shí)在鋪細(xì)胞的時(shí)候，你要準(zhǔn)確的知道你所養(yǎng)的細(xì)胞的特性，比如：

1，細(xì)胞的名稱，來源。

2，細(xì)胞的屬性。

3，細(xì)胞分裂時(shí)間。
還有，主要的是要搞清楚你的細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線，還要知道鋪板后多久可以到達(dá)什么細(xì)胞密度。

如果你準(zhǔn)確的掌握了你的細(xì)胞特性，那鋪板是分分鐘搞定的事情。

細(xì)胞鋪板后，細(xì)胞狀態(tài)不好怎么辦？

如果出現(xiàn)這種情況，學(xué)霸姐姐建議你從以下幾個(gè)方面考慮一下原因：

1，用來鋪板的細(xì)胞狀態(tài)本身就不好。

2，用來鋪板的細(xì)胞傳代次數(shù)太多，有些老化。

3，胰酶消化時(shí)間過長(zhǎng)。

4，中和的血清量及時(shí)間不夠。

5，支原體污染。
PK-1豬腎細(xì)胞系鋪板是一個(gè)經(jīng)驗(yàn)積累的過程，你的手法也需要積極的改進(jìn)，不要生搬硬套，也不要一味追求的鋪均勻，在實(shí)驗(yàn)過程中多思考細(xì)胞本身的特征和屬性，出現(xiàn)問題積極解決即可。

相關(guān)產(chǎn)品如下：

HEL 人紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 懸浮 淋巴母細(xì)胞 是 
T24 人膀胱移行細(xì)胞癌細(xì)胞 McCoy’s 5A+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣 是 該細(xì)胞源自一位81歲白人女性患者的膀胱移行細(xì)胞癌組織；來源于移行細(xì)胞癌病人的白血病和血漿對(duì)T24和相關(guān)細(xì)胞株有細(xì)胞毒性；倍增時(shí)間為19小時(shí)；含ras(H-ras)癌基因,表達(dá)腫瘤*抗原。
HuH-7 人肝癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣 是 此細(xì)胞產(chǎn)甲胎蛋白，胰酶α抗體，血漿銅藍(lán)蛋白，纖維蛋白原，纖維粘連蛋白等。
Hacat 人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣 是 該細(xì)胞源自一位62歲患有黑色素瘤男性的病灶外圍正常皮膚，角蛋白、角化細(xì)胞交聯(lián)外膜蛋白、中間絲相關(guān)蛋白陽性。
MRC-5 人胚肺成纖維細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 成纖維細(xì)胞樣 是 MRC-5細(xì)胞系來自14周齡男性胎兒的正常肺組織，該細(xì)胞老化前能傳代42到46次群體倍增。 它是正常二倍體細(xì)胞系，46，XY核型。 模式染色體數(shù)為46，概率為70%。
95-D 人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣 是 這是一株高轉(zhuǎn)移肺癌。
AsPC-1 人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣 是 該細(xì)胞來源于人胰腺癌裸鼠異種移植產(chǎn)生的癌性腹水，可以表達(dá)CEA，人胰腺相關(guān)抗原、人胰腺特異性抗原和黏蛋白。
A-431 人表皮癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣 是 該細(xì)胞源自一位患有皮膚鱗狀細(xì)胞癌的85歲女性，是Giard DJ等人建立的一系列細(xì)胞株中的一株。該細(xì)胞在免疫抑制小鼠體內(nèi)可成瘤，在瓊脂上培養(yǎng)可形成克??；是一個(gè)超三倍體人細(xì)胞株。
A2780 人卵巢癌細(xì)胞 1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣 是 從一位未接受治療的患者的癌組織中分離建系。細(xì)胞會(huì)單層生長(zhǎng)，在搖床培養(yǎng)時(shí)可懸浮生長(zhǎng)?？捎米骺顾幩幬锩舾行匝芯磕Ｐ?。
HCT-116 人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞 McCoy’s 5A+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣  HCT116是1979年Brattain M等從患結(jié)腸癌的男性病人中分離建立的3株惡性細(xì)胞之一；產(chǎn)生CEA、角蛋白。在半固體瓊脂糖培養(yǎng)基中形成克隆。HCT116在無胸腺的裸鼠有致瘤性，形成上皮樣的腫瘤。
CCRF-CEM 人急性淋巴白血病細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 懸浮 淋巴母細(xì)胞 是 G.E. Foley 等人建立了類淋巴母細(xì)胞細(xì)胞株CCRF-CEM。 細(xì)胞是1964年11月從一位四歲白人女性急性淋巴細(xì)胞白血病患者的外周血白血球衣中得到。此細(xì)胞系從香港收集而來。
HEB 人腦星型膠質(zhì)正常細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 成纖維細(xì)胞樣  
WPMY-1 人正常前列腺基質(zhì)永生化細(xì)胞 DMEM+5%FBS 貼壁 成纖維細(xì)胞樣  肌成纖維基質(zhì)細(xì)胞株, WPMY-1, 與RWPE-1 cells (ATCC CRL-11609)一樣，來源于同一張成人前列腺組織切片的周圍區(qū)域的基質(zhì)細(xì)胞。 通過一個(gè)pRSTV質(zhì)料結(jié)構(gòu)，用SV40大T抗原對(duì)基質(zhì)細(xì)胞進(jìn)行永生化。 WPMY-1細(xì)胞，與RWPE-1細(xì)胞及其它上皮細(xì)胞衍生株一樣，屬于來源于同一個(gè)前列腺的一系列細(xì)胞株。 由于它們來源于同一個(gè)前列腺的周圍區(qū)域，WPMY-1細(xì)胞株對(duì)于研究分泌和基質(zhì)與上皮細(xì)胞相互作用尤其有用。 據(jù)提供者報(bào)道，來源于同一個(gè)前列腺的RWPE-1細(xì)胞株(ATCC CRL-1)。
SW620 人結(jié)腸癌細(xì)胞 L15+10%FBS  貼壁 上皮細(xì)胞樣 是 SW620是從一個(gè)51歲男性白人組織中分離得到。 由A.Leibovitz等從一個(gè)淋巴結(jié)建株。 細(xì)胞系主要由無絨毛的小園球細(xì)胞和雙極細(xì)胞組成。 它僅合成少量癌胚抗原（CEA）且在裸鼠中有高度的致瘤性。
NCI-H520 人肺鱗癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣 是 1982年Gazdar AF等建系，源于鱗狀細(xì)胞肺癌組織；該細(xì)胞p53 mRNA表達(dá)水平較正常肺組織低，但是沒有大的結(jié)構(gòu)DNA的異常。角蛋白、波形蛋白陽性，神經(jīng)絲三聯(lián)蛋白陰性；該細(xì)胞在軟瓊脂中可形成克隆。
5637 人膀胱癌細(xì)胞 RPMI-1640 + 10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣 是 該細(xì)胞源于一位68歲的患有膀胱癌的白人男性患者。據(jù)報(bào)道，該細(xì)胞能產(chǎn)生 SCF、IL-1、IL-3、IL-6、G-CSF、GM-CSF等。
293(HEK-293) 人胚腎細(xì)胞 DMEM + 10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣 是 早期報(bào)道中指出該細(xì)胞基因組中含有腺病毒5（Ad5）基因組的左側(cè)端和右側(cè)端的DNA，但是現(xiàn)在明確了只存在其左側(cè)端的DNA。經(jīng)過對(duì)Ad5的插入點(diǎn)的克隆測(cè)序發(fā)現(xiàn)，Ad5的1～4344位線性核苷酸整合入細(xì)胞染色體19q13.2。該細(xì)胞為人類腺病毒載體擴(kuò)增的宿主?？杀磉_(dá)異常的玻連蛋白的細(xì)胞表面受體，由整合素β1亞單位和玻連蛋白受體α-v亞單位組成。生物安全級(jí)別為2級(jí)。
BT-B 人膀胱癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣 是 
LS 174T 人結(jié)腸腺癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣  該細(xì)胞是LS 180結(jié)腸腺癌細(xì)胞株的胰蛋白酶化變種。它比親本更易傳代，像LS 180一樣生成大量的癌胚抗原(CEA)。電鏡研究表明，它有豐富的微絲和胞漿黏液素液泡；血清學(xué)檢測(cè)直腸抗原3陽性；p53抗原表達(dá)陰性，但mRNA表達(dá)陽性；角蛋白陽性；癌基因c-myc、N-myc、H-ras、N-ras、Myb和fos的表達(dá)呈陽性；癌基因k-ras和sis的表達(dá)未做檢測(cè)；可產(chǎn)生IL-10、IL-6和黏蛋白。
AAV-293 腺病毒轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣  我們推薦使用AAV-293細(xì)胞株繁殖腺病毒相關(guān)重組病毒。 AAV-293源自普遍使用的 HEK293細(xì)胞株，但產(chǎn)生的病毒滴度更高。 HEK293細(xì)胞是剪切過的腺病毒5型DNA轉(zhuǎn)染的人胚腎細(xì)胞。 跟HEK293細(xì)胞一樣，AAV-293細(xì)胞反式表達(dá)腺病毒E1基因，當(dāng)共轉(zhuǎn)染三個(gè)AAV助質(zhì)粒(一個(gè)含ITR的質(zhì)粒，pAAV-RC, 和E1缺失助質(zhì)粒)時(shí)，可以產(chǎn)生有感染力的腺病毒-相關(guān)病毒顆粒。
Hep 3B(Hep 3B2.1-7) 人肝癌細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣 是 Hep-3b細(xì)胞建系于1979年，源自一位患有肝癌的7歲黑人男童。該細(xì)胞產(chǎn)生甲胎蛋白（alpha-fetoprotein)、乙肝表面抗原（BHsAg) 、白蛋白、巨球蛋白、α- 抗胰蛋白酶（alphal-antitrypsin)、轉(zhuǎn)鐵蛋白、補(bǔ)體（C3)、C3活性載體，纖維原等，具有廣泛的研究?jī)r(jià)值。
BxPC-3 人原位胰腺腺癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣 是 該細(xì)胞表達(dá)黏蛋白、胰腺癌特異抗原和癌胚抗原。裸鼠皮下注射10的7次方細(xì)胞，在21天內(nèi)*成瘤。該細(xì)胞不表達(dá)囊性纖維化跨膜傳導(dǎo)調(diào)節(jié)蛋白（CFTR)。
HT-1080 人纖維肉瘤細(xì)胞 DMEM+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣 是 該細(xì)胞源自一名35歲患有纖維肉瘤的白人男性的結(jié)締組織；ras＋。
BT-549 人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS+0.023IU/ml Insulin 貼壁 上皮細(xì)胞樣 是 BT-549細(xì)胞的來源組織是一個(gè)狀侵入性導(dǎo)管瘤，7個(gè)局部淋巴結(jié)中3個(gè)已有轉(zhuǎn)移。由此組織建立的BT-549細(xì)胞是多態(tài)性的，包括上皮細(xì)胞樣組分和多核巨細(xì)胞。
NCI-N87 人胃癌細(xì)胞 RPMI-1640+10% FBS 貼壁 上皮細(xì)胞樣 是 NCI-N87細(xì)胞表達(dá)表面糖蛋白癌胚抗原(CEA)和TAG 72, 并且沒有左旋多巴胺脫羧酶(DDC)活性。 它們的血管活性的腸肽(VIP)受體活性極低并缺乏胃泌激素受體。